请教：细胞蛋白质提取方法推荐

have-a-rest

大家在做western blotting的时候，蛋白是怎么裂解的啊，有没有比较过哪种方法最适合裂解干细胞及其衍生物？

mansnoopy

回复 have-a-rest 的帖子2 l9 ^* I/ L4 ?! j

$ ?& S. I9 R% G, A: p! hlysis buffer

Helena110

回复 玫瑰 的帖子
+ h5 R9 @7 T, H. h* Y; d, B  M
; f# O8 c; `. G5 }; H学习了 谢谢

oklai

能多解解说说明明吗吗

oklai

好帖子就是有人看啊

yueyongheng

用PBS洗净细胞后，先用RIPA裂解，然后超声破碎，最后加入SDS样品Buffer煮沸10分钟。
! f2 G' n. i7 ?% z- o除了煮沸步骤外其他步骤建议冰浴操作。
5 ~: u( J4 M& B3 X# ?仅列举了一种，如果条件允许的话建议同一细胞样品选择几种方式来制备。

hdc2001

细胞内蛋白质的提取：
. \5 ^4 f* Y$ f* a" K1、Trixon-100或NP-40裂解液裂解；
1 W0 i4 h6 W6 l6 h# V2、冻融裂解法；( `8 k# @8 f: F3 y
3、研磨法；/ x; S: V) ^, F2 [' ?5 s
方法很多的，可根据实际情况选择的啊。

我爱光明2009

也在考虑这个问题，实验后再交流！

have-a-rest

谢谢各位！

telomerase

提干细胞，我觉得应该和普通一样的。 都是细胞啊！
0 D9 O: |. P4 R- l) W3 T2 l经典的就是分子克隆2讲的，用RIPA裂解，然后刮下来，冰裕30min，超生，4度离心10min
6 t/ t+ Z* f' J+ [, a10000g. C" r& p; c$ {# @: ?

0 W3 e  c/ `# A/ A2 `关键在于蛋白酶抑制剂好不好用4 q8 u/ S/ {6 W9 l3 d

8 X/ s& H  H/ U3 {8 ~# K) y我师姐按分子克隆配的就好使，我怎么配也不好用，当然没买cocktail7 \/ q1 w0 i' ~. A4 Y- W
你既然做干细胞，就表明你老板不缺钱。建议你不要配裂解液了，买个盒子吧。& {6 r4 p. s3 F. D% X
这个由不要好多钱。比干细胞的那些因子，便宜的多了。  不要自己配得不好用，摔在这里！！！