请教：细胞蛋白质提取方法推荐

have-a-rest

大家在做western blotting的时候，蛋白是怎么裂解的啊，有没有比较过哪种方法最适合裂解干细胞及其衍生物？

mansnoopy

回复 have-a-rest 的帖子5 r$ t- P- O# W' i. U7 \$ l
% n2 H& l2 p) O
lysis buffer

Helena110

回复 玫瑰 的帖子
1 O6 J8 ]1 u3 a5 ?! U- K! n5 k) C% ~$ K& z/ y7 B
学习了 谢谢

oklai

能多解解说说明明吗吗

oklai

好帖子就是有人看啊

yueyongheng

用PBS洗净细胞后，先用RIPA裂解，然后超声破碎，最后加入SDS样品Buffer煮沸10分钟。
  l2 Z' e3 J" V- u/ }, r除了煮沸步骤外其他步骤建议冰浴操作。# Q% V, p5 c2 L" p- n
仅列举了一种，如果条件允许的话建议同一细胞样品选择几种方式来制备。

hdc2001

细胞内蛋白质的提取：5 D( z. Z6 m. d- h* u" J, ?
1、Trixon-100或NP-40裂解液裂解；* W3 e' I9 a& }. X
2、冻融裂解法；
+ `7 ]+ i0 }1 h' t  _: h3、研磨法；* n$ t# M2 Z$ ~: V8 x
方法很多的，可根据实际情况选择的啊。

我爱光明2009

也在考虑这个问题，实验后再交流！

have-a-rest

谢谢各位！

telomerase

提干细胞，我觉得应该和普通一样的。 都是细胞啊！
0 G+ p7 A% J) c5 q经典的就是分子克隆2讲的，用RIPA裂解，然后刮下来，冰裕30min，超生，4度离心10min
' H% J" o4 `/ i, }- C$ E: A10000g, N3 K  o. O, F' k  t# c

7 g8 Y8 ^$ K% k7 m关键在于蛋白酶抑制剂好不好用, ], m5 Q" Z6 M; ?8 j5 h

2 Q! U, e1 n+ q% |! [我师姐按分子克隆配的就好使，我怎么配也不好用，当然没买cocktail0 @, l6 [6 z8 z" T2 o
你既然做干细胞，就表明你老板不缺钱。建议你不要配裂解液了，买个盒子吧。
! @; }$ d  D: }2 |& P这个由不要好多钱。比干细胞的那些因子，便宜的多了。  不要自己配得不好用，摔在这里！！！