急求如何从病人的尿液样本中分离，提取尿液上皮细胞的protocol

时一清

1、在无菌 250ml 离心瓶内加双抗 5ml,  4℃。
; B$ ?; y% _& Q% A+ S6 @2、中段尿液 150-500ml,  4℃。 1 A; y3 Z% a  K# C! l1 v: c
3、将尿液分装于 50ml 离心管中，400g 离心 10 min; 弃上清，底部预留约 2-3ml液体; 将上述尿液细胞液体合并为 1 管。 ) W6 K2 ]8 p" k& l0 _$ P) J6 ]6 r) d4 e
4、加入 PBS 至 50ml (双抗, 2x)，400 g 离心 10 min , 用 PBS 洗涤 1 次；用 3ml 尿液细胞培养基 (双抗)，重悬细胞接种于预先明胶铺被的 6 孔板。
4 ^: p- [( Q6 L7 _/ n5、静置 3 天后观察是否有尿液细胞克隆形成（克隆 3~6 天可形成，也可能超过 6天。克隆形成后 1 周~10 天可长满培养皿，根据细胞状态也可能需要更长时间）。当克 隆形成较多后，每两天更换培养基 1 次；根据实验需要培养、冻存及传代（0.25% 胰酶消化 2~3 分钟，37℃，加入饲养层细胞培养基终止消化）。 ( g6 j( H: u# w) e0 C

时一清

健康人尿液中细胞很少~成功率不高

时一清

Primary Medium： 5ml FBS，250μl P-S，100μl amphotericin B，REGM SingleQuot kit 每管 50μl，再 加入 DMEM/high glucose 和 Ham’s F12 nutrient 等量混合液加至总 50μl。 注：Store the medium in the dark at 4 °C and use it within 2 weeks.
: e+ L- f# R4 l1 M$ t. F3 q7 uRE Proliferation Medium： 50ml REBM 培养基中加入 REGM SingleQuot kit 每管 50μl。 % s# ]+ x3 F. n( q' r7 y2 o
注：Store the medium in the dark at 4 °C and use it within 2 weeks. 6 ?- a; u3 W  r, h& H  A
5 J' E0 i4 M( m7 C
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, v) k! T* Y0 x9 `& fGeneration of human induced pluripotent stem cells from urine samples.