间充质原代传代问题

余生请多指教

最近提msc到时有时候能提出来，但传代又有问题，我感觉细胞始终不能收缩成圆形，还有就是0.25%的胰酶消化原代一般要多久呢，还有msc是不是要在40倍下观察才能更好地操作，，我们实验室没有4倍的镜头，，每次用10倍看感觉好难受8 j, C8 h% S( H2 d9 C
最主要的，求传代建议：0.25%胰酶消化一般多长时间，还有视野一般在多少倍的情况呢（我培养体系：低糖+10fbs+双抗）+ b; h$ |$ a/ |( Y

理科小文艺

你说的是哪种MSC？一般的在4倍和10倍下观察就很OK了，40倍太高了。0.25%胰酶消化P0传P1，如果是组织块贴块培养出来的，消化需要2分钟左右（37摄氏度）。PS：显微镜没有4倍的镜头？该换了。

fm001982

把你的消化步骤详细写出来，细胞没变圆飘起来，估计是细节有问题。
# H, |0 X% j1 L+ i, \0.25%胰酶消化原代细胞很快，一般几十秒就够了，不容易掌握好时间，建议稀释一倍后再使用。
! p( p  d2 l3 f8 x具体消化时间需要根据显微镜观察的结果自己把握。

晗晗

胰酶浓度太高了不容易掌握时间，稀释一下。还要就是显微镜可以先在低倍的比如4倍下观察然后再在高倍镜下观察

avbn

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4 j( O$ p, k: Y, U" Y  i7 v( ^/ G$ C6 W
是不是接种的密度太小了，我们消化一般用眼看就可以了，消化过程中可拍打几次

余生请多指教

回复 fm001982 的帖子" F: k6 A% \3 Y9 Q+ A2 h

8 ^& B7 n5 S6 ~5 S" r6 q* g1 _做的bmsc，先37度预热，然后pbs洗一遍，然后加入1ml的0.25的胰酶，放显微镜下观察，100倍视野下，感觉消化个很久都有长梭型细胞不收缩，还有就是我们显微镜下100倍看这个细胞看的不太清楚，是不是要买一个4倍的镜头呢

fm001982

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# a' j* j+ @1 x5 j! Q% u
4 L5 `) w. J# Q加入酶液后首先让其在培养瓶底部均匀分散，在适度拍打培养瓶，应该是能消化起来的。
# I$ H* T3 W; c# G& S9 w另外，预热不要太久，以免酶失活太多，我一般都没预热，只是让其回复到常温。
' \; A, N# g8 _3 J镜头其实无所谓，尽量把大部分的视野观察完，看消化是否均匀。

2357710447

姨酶需要稀释一倍为0.125%的    消化过程适度拍打瓶壁    用5倍视野观察   一般小花2~3分钟    时间长了对细胞有损伤     贴壁数量会减少    希望对你有用8 G& c: s$ d: _! X$ Y# S2 [  D

快乐男孩

胰酶用之前要预热，0.25的1分钟就可以了，轻轻拍打瓶身，就下来了，但最好稀释一倍，这样不容易消化过度。

18943340581

间充质干细胞一般融合度达到80%的时候就可以传代了。可以用PBS洗两次，血清洗的比较干净。不知道你用什么容器养的细胞，可以加大于1ml的胰酶，消化时只要有大部分细胞变圆即可，有少量的细胞仍呈纺锤形也没有关系。