间充质原代传代问题

余生请多指教

最近提msc到时有时候能提出来，但传代又有问题，我感觉细胞始终不能收缩成圆形，还有就是0.25%的胰酶消化原代一般要多久呢，还有msc是不是要在40倍下观察才能更好地操作，，我们实验室没有4倍的镜头，，每次用10倍看感觉好难受
- G' V1 z6 B* b$ m  B6 r最主要的，求传代建议：0.25%胰酶消化一般多长时间，还有视野一般在多少倍的情况呢（我培养体系：低糖+10fbs+双抗）% B1 n* H6 @5 G3 D) O% c

理科小文艺

你说的是哪种MSC？一般的在4倍和10倍下观察就很OK了，40倍太高了。0.25%胰酶消化P0传P1，如果是组织块贴块培养出来的，消化需要2分钟左右（37摄氏度）。PS：显微镜没有4倍的镜头？该换了。

fm001982

把你的消化步骤详细写出来，细胞没变圆飘起来，估计是细节有问题。
4 {' q, p. k0 F6 Z) W; v! k0.25%胰酶消化原代细胞很快，一般几十秒就够了，不容易掌握好时间，建议稀释一倍后再使用。, M) R4 Q# g5 B& z
具体消化时间需要根据显微镜观察的结果自己把握。

晗晗

胰酶浓度太高了不容易掌握时间，稀释一下。还要就是显微镜可以先在低倍的比如4倍下观察然后再在高倍镜下观察

avbn

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是不是接种的密度太小了，我们消化一般用眼看就可以了，消化过程中可拍打几次

余生请多指教

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$ B/ V/ }! c7 L  G( C# K8 Q* J, V! f: a
做的bmsc，先37度预热，然后pbs洗一遍，然后加入1ml的0.25的胰酶，放显微镜下观察，100倍视野下，感觉消化个很久都有长梭型细胞不收缩，还有就是我们显微镜下100倍看这个细胞看的不太清楚，是不是要买一个4倍的镜头呢

fm001982

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2 @  a, R3 h' M2 o
5 a$ m  G& I+ i9 X. o加入酶液后首先让其在培养瓶底部均匀分散，在适度拍打培养瓶，应该是能消化起来的。
1 r7 W  x% s4 z+ F" y/ q另外，预热不要太久，以免酶失活太多，我一般都没预热，只是让其回复到常温。* H- o2 @& ^+ w6 n5 z1 O
镜头其实无所谓，尽量把大部分的视野观察完，看消化是否均匀。

2357710447

姨酶需要稀释一倍为0.125%的    消化过程适度拍打瓶壁    用5倍视野观察   一般小花2~3分钟    时间长了对细胞有损伤     贴壁数量会减少    希望对你有用4 @7 B, n* @$ J/ E0 j) Q/ A% c

快乐男孩

胰酶用之前要预热，0.25的1分钟就可以了，轻轻拍打瓶身，就下来了，但最好稀释一倍，这样不容易消化过度。

18943340581

间充质干细胞一般融合度达到80%的时候就可以传代了。可以用PBS洗两次，血清洗的比较干净。不知道你用什么容器养的细胞，可以加大于1ml的胰酶，消化时只要有大部分细胞变圆即可，有少量的细胞仍呈纺锤形也没有关系。