WB的ECL突然出问题了！

have-a-rest

最近遇到一个奇怪的现象，做WB二抗杂交后，ECL显色突然出了问题：不发光。排除前面步骤出问题，因为有些膜我是经过stripping的，前面都没问题。pierce的ECL，质量绝对保障，而且买回来不到半年。0 H& P, A5 F4 l* U' V
请高人分析。

饶冠华

呵呵 这个现象在我们实验室也碰到过 后来不知怎么的就解决了  但一直不知道什么原因

痞子的烟头

建议：) B& H6 A7 @) r, [: I+ W
1. 爆光时间？
6 P% @2 ?! r( w' b2.确定显影定影液没有问题
6 {- _! T' e- ], Q3.二抗特异性如何？% L' |" b( ]: [
4.ECL量注意20*或1*
! Q+ b0 k8 t6 d; n9 W具体问题得自己尝试！

have-a-rest

原因还得自己找啊。% j9 J5 q9 k. `! z8 W; M
经过核对实验记录和分析，觉得问题出在抗体稀释液上。前几天偷了懒，一次配制的稀释液留着几次用，虽然放在4度，但也许坏掉了。重新用了新配的稀释液，原来的膜洗了一下，再杂交，结果就出来了！" ~1 N( s, W/ Z' A2 Z5 m0 V, `- J
和大家分享，希望引以为戒，千万不要偷懒！