小鼠的脂肪间充质干细胞做流式鉴定怎样去除细胞黏连问题？求指教

zhouyonhzhan

小鼠的脂肪间充质干细胞做流式鉴定怎样去除细胞黏连问题？求指教

刘小白and刘小黑

流式去粘连在前侧向圈定主细胞群后，加一张A-W或者A-H的图，圈定密集区域就可以了，后续分析的细胞都来自于去粘连圈定的就好了。

cuijiaoyan

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/ r( p: d# W5 A9 M; F- X7 ^/ m! m7 y- O
一个一个排除吧，抗体没问题，流式仪设置没问题的话，那就是细胞的问题了。可以找个别人的MSC作为阳性细胞，检测一下流式仪的设置是不是有问题，一般间充质阳性表面marker不会检测不出来的，除非你的细胞不是间充质，建议你上个细胞状态的图，大家帮你看看细胞。

2357710447

回复 zhouyonhzhan 的帖子3 y' M# T( F+ Q6 l: ]$ P
% F0 r" f; h2 T+ g3 T  M
我觉得数量应该不会是你图像出错的关键原因   还是要找一下其它原因

2357710447

上样的时候每管几乎都两万以上，吸取的时候每都是吸取一万个，我做的和你们的有点差距

zhouyonhzhan

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2 ~1 _5 x' T8 a& m/ ]" q. }6 v5 d, I
想问一下我们检测时用的单抗体CD44、 CD45 、CD3 CD90、CD105每管只有一万个细胞。会对检测结果有决定性影响？我们在怀疑自己方案和培养基的问题。比较着急

zhouyonhzhan

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3 a7 U. d0 J% I; m3 H9 Q4 @5 {0 p
) `+ {( @8 b% ?  l8 S, L& ~我们用肌细胞检验了一下抗体没有问题。但是检测们的脂肪间充质干细胞全压在两个坐标轴上，检测的阳性指标和阴性指标一样表达很少。

2357710447

回复 zhouyonhzhan 的帖子3 G3 p" d- ~0 q
( n! B$ s3 G" ]+ z( e1 u% Z9 h
上个图片看看     可能是做流式的模板上某些值没有设置正确或者是没有设置、有可能是M值

cuijiaoyan

回复 zhouyonhzhan 的帖子3 r2 K+ t) G3 S

5 M2 P3 j: a( d8 d% S; y流式的门设置没问题的话，考虑一下抗体的问题。

zhouyonhzhan

回复 2357710447 的帖子% q& |0 p5 ^; H! M2 ~; v+ F; w

2 j& k. N1 C4 u+ q( s做流式细胞总是压在两个坐标轴上，且做不出阳性结果。请问大神是什么原因？