麻烦大家帮我看看我的人MSC发生了什么。。。。。

zhaobing3034653

之前我用的培养基是上海细胞库的配的培养基，感觉细胞还不错，如下图
* A$ e) m* A; a- h) K( I8 m
5 s  c/ ^- x, j& E+ G! m7 I5 `
# ~" Q. `# D0 D+ k9 l9 |
7 H* {# h7 H% D$ v1 b/ c7 ?但是后来他们的培养基断货了，我就只能自己硬着头皮看文献配了下培养基，配方是：MEMa+10%FBS。结果就成了下面这个样子& @8 w! Q+ K+ i' c; J* ?, Q

: w1 U1 y0 n/ b+ b5 l# Y1 Q8 W: |6 I
* t9 t& N1 b0 k' L7 H, p1 Q
小弟不是细胞专业户，碰到这样有点慌 0 ]+ T1 W& _3 q* e  B4 u, U" c
哪位大神帮分析下，这正常么？细胞养成这样还能进行下面的实验不？是不是发生了分化？

cuijiaoyan

细胞变宽多分叉，分化了，养了几天啊？接种密度多少？

wangddk

应该是分化了

zhaobing3034653

回复 cuijiaoyan 的帖子* [2 u. R! d6 Z% H. D0 j; j/ n

3 i' u8 d6 B% r+ l3 q细胞变宽分叉多就是代表分化了？这个大概是8代左右的样子。接种密度没有计算，反正每次都是长到80%，然后一传二。

cuijiaoyan

你的细胞应该叫老化吧，干细胞老化有下面这些表现，你对比一下看是不是：8 \8 V# j, Z: E. G) g6 N9 T7 g
, l9 Z3 E) q" z+ `6 q
细胞胞浆内特别是在核区附近出现黑色颗粒，表示细胞开始出现老化；
& e- p3 B: {3 \2 t) V6 G' ~9 I# X0 B
细胞胞浆内出现空泡，则表明该细胞已老化或者已经开始分化（在全部细胞中出现少数老化细胞是正常的）；
5 Y3 K( Z6 o  \! C
/ h3 L' n) R1 j2 e9 J$ Y+ u细胞立体感逐渐消失，细胞间的间隔不清，部分细胞扁平状，细胞的形状趋向多样；
# ?' g+ g3 L9 }3 Q  O" |" J; ^$ S  B% M$ u
贴壁性减退，出现一些漂浮的细胞；; H3 S/ n* ]. R" G2 G8 a

3 ~$ w8 U" C9 Z+ `% e1 z部分分泌强的细胞分泌物增多，细胞表面会比较脏；
6 A5 a. J; S! j0 u! q& n" `  w6 r( H
, C* ]& W4 C* U" F( Y+ f- }/ O细胞增殖速度明显下降，分裂相的细胞明显减少。
& f8 m5 `5 j. o/ A: ]2 q& I) s5 z后面看你要做哪些检测，有一些检测这个细胞还是凑合可以用的。

阿秀哥

这不该叫分化吧，应该叫老化。你的细胞传了几代出现老化其实也是正常的

ltickp

老化了

Ivan0108

明显是细胞老化了

innatestem

回复 cuijiaoyan 的帖子
  ]! _, b* q) j3 E9 R( l" m& c( Y, M' [# f) m/ U1 a2 g
小弟也是细胞新手，请教大神不同组织（脐带，骨髓或者脂肪组织）来源的MSCs的培养条件是否相同？此外，大神能不能提供一下分离，培养MSCs的实验流程以及培养基配方？万分感谢~

cuijiaoyan

不同来源的MSC培养条件大致都是相同的，MSC扩增融合到约80%时消化传代或冻存；MSC分离培养要看你的来源是什么，不同来源的原代MSC分离方法不同，脐带来源的要剥胶，骨髓来源的要用ficoll分，不同来源的MSC所用的培养基差异不大，培养基我们一直用的α-MEM+10%FBS