麻烦大家帮我看看我的人MSC发生了什么。。。。。

zhaobing3034653

之前我用的培养基是上海细胞库的配的培养基，感觉细胞还不错，如下图. B+ C; @# [# L  {

* L% e4 y( Q+ k! s
) {- Y2 R/ B$ T7 S& ]. ^) h+ [  L# P; F6 U( I' ]
但是后来他们的培养基断货了，我就只能自己硬着头皮看文献配了下培养基，配方是：MEMa+10%FBS。结果就成了下面这个样子
$ u" O) p* c; N2 r/ N: }  Y4 [. M7 X; L7 ^  Z
( B" C$ a& |; E# G+ j2 a" y

' ~  h2 _/ c8 F: r8 }小弟不是细胞专业户，碰到这样有点慌
& y( y9 }/ e6 a7 Y" B* w/ a8 ^! g  Z哪位大神帮分析下，这正常么？细胞养成这样还能进行下面的实验不？是不是发生了分化？

cuijiaoyan

细胞变宽多分叉，分化了，养了几天啊？接种密度多少？

wangddk

应该是分化了

zhaobing3034653

回复 cuijiaoyan 的帖子5 q9 O5 y0 H, U2 N
; @$ n6 U5 j  R5 b' Q3 R5 v
细胞变宽分叉多就是代表分化了？这个大概是8代左右的样子。接种密度没有计算，反正每次都是长到80%，然后一传二。

cuijiaoyan

你的细胞应该叫老化吧，干细胞老化有下面这些表现，你对比一下看是不是：$ [2 }" T& |* ~9 ?
/ d# M, P' I, I+ Q* T! B4 P$ z" @" I
细胞胞浆内特别是在核区附近出现黑色颗粒，表示细胞开始出现老化；/ x/ U9 d/ D2 H( q
5 n: E0 u. a& |
细胞胞浆内出现空泡，则表明该细胞已老化或者已经开始分化（在全部细胞中出现少数老化细胞是正常的）；
2 @/ u. Q7 F- E/ Q' S6 Z9 h9 W6 R0 ]% F
细胞立体感逐渐消失，细胞间的间隔不清，部分细胞扁平状，细胞的形状趋向多样；) }. {; v3 w# M1 n6 Y+ y
8 }# E( T3 G8 k# d
贴壁性减退，出现一些漂浮的细胞；
6 W% {- a# o" z& S) M' O6 y- I
+ u  D, a2 w+ z/ e# V+ B部分分泌强的细胞分泌物增多，细胞表面会比较脏；( V9 A4 H. m* b0 D, Z

6 S8 K  M9 F9 e# O# l+ S细胞增殖速度明显下降，分裂相的细胞明显减少。
" A5 U( P" D6 F' S1 m: l后面看你要做哪些检测，有一些检测这个细胞还是凑合可以用的。

阿秀哥

这不该叫分化吧，应该叫老化。你的细胞传了几代出现老化其实也是正常的

ltickp

老化了

Ivan0108

明显是细胞老化了

innatestem

回复 cuijiaoyan 的帖子
- a1 G8 j' p3 M' I( e5 d! }- ?5 L3 G
小弟也是细胞新手，请教大神不同组织（脐带，骨髓或者脂肪组织）来源的MSCs的培养条件是否相同？此外，大神能不能提供一下分离，培养MSCs的实验流程以及培养基配方？万分感谢~

cuijiaoyan

不同来源的MSC培养条件大致都是相同的，MSC扩增融合到约80%时消化传代或冻存；MSC分离培养要看你的来源是什么，不同来源的原代MSC分离方法不同，脐带来源的要剥胶，骨髓来源的要用ficoll分，不同来源的MSC所用的培养基差异不大，培养基我们一直用的α-MEM+10%FBS