麻烦大家帮我看看我的人MSC发生了什么。。。。。

zhaobing3034653

之前我用的培养基是上海细胞库的配的培养基，感觉细胞还不错，如下图0 I- N$ K" B" u8 h% i4 G/ p
; Q( z% z) }5 q

5 u$ g9 i5 i% s  o. a$ q# G4 @  W3 U' E, K9 L+ d
但是后来他们的培养基断货了，我就只能自己硬着头皮看文献配了下培养基，配方是：MEMa+10%FBS。结果就成了下面这个样子
. Q' J2 }& t. v. @1 J# Y6 |( L! n! a& E. k! H* t  W1 V
2 l3 `/ z  ^* o  ?0 o* B

& D7 n3 X5 V- @! V小弟不是细胞专业户，碰到这样有点慌 + d2 l7 ]! \% j
哪位大神帮分析下，这正常么？细胞养成这样还能进行下面的实验不？是不是发生了分化？

cuijiaoyan

细胞变宽多分叉，分化了，养了几天啊？接种密度多少？

wangddk

应该是分化了

zhaobing3034653

回复 cuijiaoyan 的帖子
. d0 c2 L0 U; m
- u6 |# h& r  W! b' l: l4 j细胞变宽分叉多就是代表分化了？这个大概是8代左右的样子。接种密度没有计算，反正每次都是长到80%，然后一传二。

cuijiaoyan

你的细胞应该叫老化吧，干细胞老化有下面这些表现，你对比一下看是不是：
& a6 B4 F2 T+ ?' w# t! l4 o! Y, n- [. k1 Z
细胞胞浆内特别是在核区附近出现黑色颗粒，表示细胞开始出现老化；# X- C* X0 ~9 i# j- H1 \; ~
) @  o6 O7 `6 X
细胞胞浆内出现空泡，则表明该细胞已老化或者已经开始分化（在全部细胞中出现少数老化细胞是正常的）；
+ E" t7 \5 |1 g5 X& v# t4 t3 Y! t6 g
: L7 j# S, Q3 r+ a; L细胞立体感逐渐消失，细胞间的间隔不清，部分细胞扁平状，细胞的形状趋向多样；
6 p% I* A; \' R* J$ Y! j# b5 \" T- S" W* Z+ f. K- f( s0 `
贴壁性减退，出现一些漂浮的细胞；  p/ q! W( b8 y2 I9 m$ _

8 @: U6 N; e: L8 p& E8 G  j部分分泌强的细胞分泌物增多，细胞表面会比较脏；/ n2 I5 q# c2 D/ ^) H

' V' h) ?7 p" F) Y$ E. r细胞增殖速度明显下降，分裂相的细胞明显减少。
1 \0 i7 u6 f3 f$ z( r1 A" ~后面看你要做哪些检测，有一些检测这个细胞还是凑合可以用的。

阿秀哥

这不该叫分化吧，应该叫老化。你的细胞传了几代出现老化其实也是正常的

ltickp

老化了

Ivan0108

明显是细胞老化了

innatestem

回复 cuijiaoyan 的帖子
# {4 |8 W0 v2 M; `0 S4 u( b* [" o3 u# D/ E0 ]3 m
小弟也是细胞新手，请教大神不同组织（脐带，骨髓或者脂肪组织）来源的MSCs的培养条件是否相同？此外，大神能不能提供一下分离，培养MSCs的实验流程以及培养基配方？万分感谢~

cuijiaoyan

不同来源的MSC培养条件大致都是相同的，MSC扩增融合到约80%时消化传代或冻存；MSC分离培养要看你的来源是什么，不同来源的原代MSC分离方法不同，脐带来源的要剥胶，骨髓来源的要用ficoll分，不同来源的MSC所用的培养基差异不大，培养基我们一直用的α-MEM+10%FBS