菜鸟关于造血干细胞的一些问题请求有经验朋友的帮助

gadfly2008

有几个实验俺这个菜鸟打算要做，
$ r$ B8 a4 j( K5 e: [1 f3 @! B5 t8 \+ [- q- \1 s! T$ r
首先分离周围细胞血液来源的CD34，然后用慢病毒感染导入T细胞特意表达的启动子和GFP蛋白，扩增后移植到NSG小鼠人源化，在之后还要再次分离cd34来做分化成T细胞的实验，其中涉及很多相关实验技巧和经验，现在还都不清楚，希望有经验的大牛能够帮助解答，非常感谢！
, A1 H9 K3 B, G! w' F& |+ Z, H! q% i& C4 m" N, [0 P# t7 S; P+ e" T
9 W* N- J% F, T: V0 q( F; G4 |$ W
A，想问下关于造血干培养的时间是有限的吧？新鲜提取的cd34干细胞能够增殖大概多少代？培养多少天？
9 j( G  O% |1 U, @$ g* m" H: M7 H5 v! a8 C* K$ s
B，想问下造血干的培养液体和半固体区别？老板打算从stemcell购买相关培养试剂，请问有人用过？有何注意事项？
. S9 O1 j4 w5 K- K" k" _0 Y9 S% c: R( Y1 p4 W) d( U
C，关于CD34的基因导入，准备使用慢病毒体系感染导入外源基因，但是慢病毒载体开始设计时只加入了目的蛋白，并未加入筛选基因。查阅文献发现cd34外源基因导入后貌似也没几个人通过筛选富集，请问是不能长期传代的原因？还是因为筛选富集会对干性有影响？还有不筛选的话，扩增出来的都是未转染的，人源化后带目的基因的很少，那么岂不是大打折扣？
0 D' ?9 z1 H+ }1 _& I& |4 i# \; ]) S* Y! R2 D- c0 Q
D, 因为我要做进一步的人源化小鼠，导入外源基因后需要一定数量的cd34，想问关于CD34扩增的问题，也打算用stemcell的expansion10x系统，请问谁有经验？E，关于HSC细胞的分化 主要是分化为单核细胞，巨噬细胞和T细胞，有无官方些或者标准化的protocol，查了文献发现很多的方法都很不同，想咨询下大牛们或者有无参考网站或者书籍？还是只能通过文献？
, I' G6 d0 V$ N, V3 Q
0 f3 j/ r2 [. O7 A/ E1 v0 {谢谢！！！