菜鸟关于造血干细胞的一些问题请求有经验朋友的帮助

gadfly2008

有几个实验俺这个菜鸟打算要做，
, p( ?; N0 s2 g4 ^2 F! Z9 [+ M& w! y0 A
3 [% Q; [$ h) _; T& Y首先分离周围细胞血液来源的CD34，然后用慢病毒感染导入T细胞特意表达的启动子和GFP蛋白，扩增后移植到NSG小鼠人源化，在之后还要再次分离cd34来做分化成T细胞的实验，其中涉及很多相关实验技巧和经验，现在还都不清楚，希望有经验的大牛能够帮助解答，非常感谢！' O$ f9 \) D8 O6 i/ S8 X- j. _

3 c; Y; N: f; I4 x6 j
$ r; c# i3 k7 a7 g' w: V& AA，想问下关于造血干培养的时间是有限的吧？新鲜提取的cd34干细胞能够增殖大概多少代？培养多少天？% |7 a5 s! r- @* l& P' T  f

% X, ]3 t# w% z8 o8 B+ X8 r0 eB，想问下造血干的培养液体和半固体区别？老板打算从stemcell购买相关培养试剂，请问有人用过？有何注意事项？
( |3 ?- X: _/ b( F0 h' o; H# k. ^- `$ E$ v( L. K
C，关于CD34的基因导入，准备使用慢病毒体系感染导入外源基因，但是慢病毒载体开始设计时只加入了目的蛋白，并未加入筛选基因。查阅文献发现cd34外源基因导入后貌似也没几个人通过筛选富集，请问是不能长期传代的原因？还是因为筛选富集会对干性有影响？还有不筛选的话，扩增出来的都是未转染的，人源化后带目的基因的很少，那么岂不是大打折扣？7 s% Y! L9 ^& s8 @  c
; L9 d. L2 X2 y+ j
D, 因为我要做进一步的人源化小鼠，导入外源基因后需要一定数量的cd34，想问关于CD34扩增的问题，也打算用stemcell的expansion10x系统，请问谁有经验？E，关于HSC细胞的分化 主要是分化为单核细胞，巨噬细胞和T细胞，有无官方些或者标准化的protocol，查了文献发现很多的方法都很不同，想咨询下大牛们或者有无参考网站或者书籍？还是只能通过文献？
0 `4 Y" D) R. S/ g  `: ?( n; s2 V/ M& o7 _( j& r4 j% u+ V
谢谢！！！