【讨论】大鼠MSC的培养稳定性

archangels

刚开始做实验，很多细节掌握不好，有不少问题，看了一下和很多战友问题有类似，希望能从大家讨论中得到帮助。* I2 E5 _7 }5 Y) h5 j, x* J4 @
1、实验中传代后细胞状态不稳定，刚开始P1-P3形态保持稳定，但后期传代很容易出现细胞堆积成团无法吹打成细胞悬液，导致以后形态发生多角形等改变。% n" G7 v$ U1 u. v+ p) b; r
2、传代时候细胞消化时间不均一，到底是取容易消化下来的还是难以消化的呢？
( c$ B( j% j% s2 c8 p3、培养基的选择，DMEM/F12、DMEM、DMEM/LG都有用过，效果均不是特别突出理想的，但DMEM/F12在文献中似乎提到有诱导软骨分化的作用。
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/ G/ T% s6 x: b/ p, F3 H: m看到大家实验室的技术都很成熟了非常羡慕，不稳定的细胞做实验很难做下去了。

泡沫清风

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$ X; l0 q% Q! C* A: t
一般想做漂亮的实验，MSC都是用前三代，后面的基本不用。因为分化的多，细胞不修长。
% ]$ k0 T$ f2 I8 s4 AMSC贴壁牢固，细胞大，容易成团，消化的时候用胰酶+EDTA。
* |& P+ M2 |7 Q5 r6 V% R2 X" T多角形的细胞就不好了。好的MSC应该是瘦修长的，梭型。
2 @3 O& N0 p) z我们实验室也是用DMEM/F12，血清浓度低点，浓度高容易分化。我们用4%血清浓度。如果你觉得培养基不行，可以直接买公司的成品，里面好像加因子的。具体我不是很清楚。

archangels

谢谢泡沫清风，血清浓度我还没调整过，尝试下。

helenkim

我也要做大鼠MSC了，学习中，谢谢

nobelmao

我用 α-MEM+20%血清，貌似容易导致分化，想试试二楼的方法，只是不知道4%的血清的条件下，细胞增殖速率怎么样？   P) h7 y0 j4 O# c1 Q0 L; ^3 u
您是从分离开始就用4%的血清么？谢谢了

helen841102

百分之4的浓度是不是太低了

zhangl

能否请问泡沫清风用4%血清浓度培养是人的还是鼠的MSC？用的什么培养基？什么品牌的血清，是否还加了生长因子？如有可能能不能提供您发表的文献？

illidancui

我也觉得4%增值速率是个问题呃

zsc78

如果经费允许,直接买Cyagen,Invitrogen等的现成培养基使用.效果还不错.

mag2722

我用的是FBS 10%