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go

请问造血集落培养的相关问题 [复制链接]

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楼主
发表于 2009-7-13 13:56 |只看该作者 |正序浏览 |打印
求助:造血集落培养时应注意什么,琼脂和甲纤那个好些,我做染色怎么做

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小小研究员

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发表于 2011-5-10 00:41 |只看该作者
回复 verakiww 的帖子, n2 n& P; w( U+ w

1 H; T$ L2 W2 T+ A% Z4 h$ ^有问题直接在论坛发帖吧

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发表于 2011-5-9 23:52 |只看该作者
回复 wuweitmc 的帖子
: G% r- U2 P8 E6 y$ A( O' Z3 x- ], ~0 u" i
你好 我看了你的造血干细胞集落培养的回复 很想加你qq向你请教 可以吗 万分感谢!我的qq357894999  希望你可以方便加我 谢谢啦

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发表于 2011-1-14 14:49 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
回复 wuweitmc 的帖子
3 V6 O: @' U$ |2 H2 F. a6 N5 _% z$ ?1 r$ D& ?: F
您好厉害 得多多向您学习
) `; L7 Q6 J/ I" G

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地板
发表于 2010-11-4 23:21 |只看该作者
回复 4# wuweitmc $ i. Q: s. S8 V: Y$ Q2 b
9 |2 U$ T! Z) T! J7 }; B

- N2 N- p- Y3 ^1 C, g5 J! \3 w    有没有造血干细胞的镜下图片??

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金话筒 优秀会员

报纸
发表于 2009-8-1 12:48 |只看该作者
4# wuweitmc
* F, h) B: Z) P3 K' d
+ O7 s$ C, G! C1 ~6 Q! ~. f! n( {# J% E: E& c. Q
这位大哥怎么联系,我现在就是要做集落的培养,想多向你请教一下如何操作,能否留个联系方式那?

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板凳
发表于 2009-7-13 14:13 |只看该作者
一看就知道是新手,我来说说,我做了一年的集落培养。
5 y5 ~" N! Q2 _- w: W) C造血集落的培养也叫半固体培养,常见的有甲纤、琼脂和血凝块培养。各有所长,甲纤培养可以一劳永逸,使用时拿来就能用很方便;而琼脂就不那么方便了,现用现溶,并且操作时要眼疾手快,否则前功尽弃;你如果做琼脂培养我再给你详细说说,到时联系我。并且做HPP-CFC时,用琼脂培养容易些,虽然文献报道可用甲纤培养,但我没能培养出。4 [9 x  ^" q8 C# M
培养时注意的问题很多,我在前些时候也说过,在重复一下,归纳起来有如下几点:1.做甲纤培养,混匀时动作轻柔,避免起泡,起泡后影响集落形成;另外甲纤一定最后加入。
6 @" F  A8 ?' N& S9 S9 m+ L2.种完体系后,别忘了,在孔周围加点无菌蒸馏水,防止培养过程体系水分丢失,水分丢失体系易干影响集落形成,因为培养集落时间一般在7天左右,甚至21天,mCFU-GM 7d,hCFU-GM 14d,CFU-E 3d ,BFU-E 14d CFU-GEMM 14d ,HPP-CFC 21d.+ e% t! _' U$ ~) M( T2 P9 j: ?
3.培养HPP-CFC要用琼脂来做。我用甲纤做过,不长HPP-CFC,反而长CFU-GEMM,同样体系用琼脂做,可获得HPP-CFC,做BFU-E,CFU-E时,甲纤做的很好,集落很漂亮。琼脂做集落关键掌握手法,琼脂不能太热,太热细胞易被烫死,太凉不凝,加时边加边摇匀。
6 u0 z) z- [5 Z4 {. M6 E4.血清的选择也很重要,有的血清适合做红系,有的适合做粒系,所以首先要知道你要做什么集落,选择适合的血清。
) l3 W( h0 v0 B2 }- D% W染色,你说的太笼统了,集落染色有很多种,例如:吉姆萨,瑞士-吉姆萨,联苯胺染色。最近我做了瑞士-吉姆萨染色,原位的话,首先挑出集落于波片上,然后用醋酸纤维薄膜压片,然后甲醇固定,再染色,染色5分钟,可以立即观察,也可封片以后再看。

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藤椅
发表于 2009-7-13 14:12 |只看该作者
一般培养CFU-GM采用琼脂半固体培养方法
. B$ D: C; w* F$ l培养CFU-E/BFU-E/CUF-Meg/CFU-Mix采用甲纤培养体系!
0 E* k% x0 L; l# n: |( P具体要求实在内容太多!要写一本书了!
. `" q  Y( N3 ^9 k! E染色方法也是一样!4 j1 S4 P2 b/ T3 J$ P( G/ x
具体看你要作什么!你的问题太笼统!不好回答!6 c4 }* N9 A: r8 f
祝你好运!

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沙发
发表于 2009-7-13 14:12 |只看该作者
培养液PH.7.0-7.2为好- q  A: Z8 v  i& H% X$ k
血清.马血清.牛血清.人血清.培养造血祖细胞以健康马血清为好.切忌使用蛋白沉淀物质的血清( k9 ]3 V/ O& M( r. e1 O5 ~: [2 j
刺激因子要严格遵守各类刺激因子的制作程序8 a& z0 w' }: x4 c
支持物.包括琼脂和甲纤及血浆凝块等.要注意浓度的控制和加入支持物时的操作手法.
; j( @) q: D- j; @/ D1 B; D. ^8 I7 N温度湿度及CO2要恒定.
8 S' ~. Z9 G9 t最好做预实验.检测培养液.刺激因子.琼脂及器皿等是否合格.
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