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一看就知道是新手，我来说说，我做了一年的集落培养。* D' }, O$ ?5 ^5 M
造血集落的培养也叫半固体培养，常见的有甲纤、琼脂和血凝块培养。各有所长，甲纤培养可以一劳永逸，使用时拿来就能用很方便；而琼脂就不那么方便了，现用现溶，并且操作时要眼疾手快，否则前功尽弃；你如果做琼脂培养我再给你详细说说，到时联系我。并且做HPP-CFC时，用琼脂培养容易些，虽然文献报道可用甲纤培养，但我没能培养出。
* ]* I. S; L# D9 l培养时注意的问题很多，我在前些时候也说过，在重复一下，归纳起来有如下几点：1.做甲纤培养，混匀时动作轻柔，避免起泡，起泡后影响集落形成；另外甲纤一定最后加入。
) [* i' @. Y' e2 q5 m" C2.种完体系后，别忘了，在孔周围加点无菌蒸馏水，防止培养过程体系水分丢失，水分丢失体系易干影响集落形成，因为培养集落时间一般在7天左右，甚至21天，mCFU-GM 7d,hCFU-GM 14d,CFU-E 3d ,BFU-E 14d CFU-GEMM 14d ,HPP-CFC 21d.
$ S- w* R/ i7 ^4 i0 K+ c3.培养HPP-CFC要用琼脂来做。我用甲纤做过，不长HPP-CFC，反而长CFU-GEMM，同样体系用琼脂做，可获得HPP-CFC，做BFU-E,CFU-E时，甲纤做的很好，集落很漂亮。琼脂做集落关键掌握手法，琼脂不能太热，太热细胞易被烫死，太凉不凝，加时边加边摇匀。1 ^. f2 F9 }+ ? Y2 K$ c6 ?9 ^
4.血清的选择也很重要，有的血清适合做红系，有的适合做粒系，所以首先要知道你要做什么集落，选择适合的血清。 4 g" ?8 T" o( T) c" O
染色，你说的太笼统了，集落染色有很多种，例如：吉姆萨，瑞士－吉姆萨，联苯胺染色。最近我做了瑞士－吉姆萨染色，原位的话，首先挑出集落于波片上，然后用醋酸纤维薄膜压片，然后甲醇固定，再染色，染色5分钟，可以立即观察，也可封片以后再看。 |
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发表于 2009-7-13 13:56
发表于 2011-5-10 00:41
