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请问造血集落培养的相关问题 [复制链接]

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楼主
发表于 2009-7-13 13:56 |只看该作者 |正序浏览 |打印
求助:造血集落培养时应注意什么,琼脂和甲纤那个好些,我做染色怎么做

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小小研究员

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发表于 2011-5-10 00:41 |只看该作者
回复 verakiww 的帖子8 Q; J4 d5 e2 U/ _! [% I1 h
% a: c! T+ _# R/ m  j
有问题直接在论坛发帖吧

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发表于 2011-5-9 23:52 |只看该作者
回复 wuweitmc 的帖子
* k, y1 V6 n$ u5 ?0 _
/ G# ?( I# J; e) j: \0 s你好 我看了你的造血干细胞集落培养的回复 很想加你qq向你请教 可以吗 万分感谢!我的qq357894999  希望你可以方便加我 谢谢啦

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发表于 2011-1-14 14:49 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
回复 wuweitmc 的帖子
$ K0 x, S1 I  A9 _; b
5 O* X& d4 Y. R' n* B4 ]- ^您好厉害 得多多向您学习5 v  G) Q1 E/ Y! V

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地板
发表于 2010-11-4 23:21 |只看该作者
回复 4# wuweitmc
; y/ q4 {! y* e1 E% ~: `- w$ N4 \, m
7 f; a. P3 U2 F9 B- B: [: U) P% L- v8 C% C+ Y3 n2 O" v
    有没有造血干细胞的镜下图片??

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金话筒 优秀会员

报纸
发表于 2009-8-1 12:48 |只看该作者
4# wuweitmc
: M: W; ~5 W4 n5 a4 Q# y. W- F% t" R( t. @3 Y

4 Q& o$ i+ T2 G8 s- m这位大哥怎么联系,我现在就是要做集落的培养,想多向你请教一下如何操作,能否留个联系方式那?

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板凳
发表于 2009-7-13 14:13 |只看该作者
一看就知道是新手,我来说说,我做了一年的集落培养。
) {# S* I6 A3 g) a6 l造血集落的培养也叫半固体培养,常见的有甲纤、琼脂和血凝块培养。各有所长,甲纤培养可以一劳永逸,使用时拿来就能用很方便;而琼脂就不那么方便了,现用现溶,并且操作时要眼疾手快,否则前功尽弃;你如果做琼脂培养我再给你详细说说,到时联系我。并且做HPP-CFC时,用琼脂培养容易些,虽然文献报道可用甲纤培养,但我没能培养出。* E. o/ @2 f* ?/ R3 B/ r" e
培养时注意的问题很多,我在前些时候也说过,在重复一下,归纳起来有如下几点:1.做甲纤培养,混匀时动作轻柔,避免起泡,起泡后影响集落形成;另外甲纤一定最后加入。8 w/ j. G. s3 M! x* F  n
2.种完体系后,别忘了,在孔周围加点无菌蒸馏水,防止培养过程体系水分丢失,水分丢失体系易干影响集落形成,因为培养集落时间一般在7天左右,甚至21天,mCFU-GM 7d,hCFU-GM 14d,CFU-E 3d ,BFU-E 14d CFU-GEMM 14d ,HPP-CFC 21d.( J; g5 ~5 C' P
3.培养HPP-CFC要用琼脂来做。我用甲纤做过,不长HPP-CFC,反而长CFU-GEMM,同样体系用琼脂做,可获得HPP-CFC,做BFU-E,CFU-E时,甲纤做的很好,集落很漂亮。琼脂做集落关键掌握手法,琼脂不能太热,太热细胞易被烫死,太凉不凝,加时边加边摇匀。
" n2 ~: I2 }9 I8 C4.血清的选择也很重要,有的血清适合做红系,有的适合做粒系,所以首先要知道你要做什么集落,选择适合的血清。 ) @! X! j" q. B5 w- h
染色,你说的太笼统了,集落染色有很多种,例如:吉姆萨,瑞士-吉姆萨,联苯胺染色。最近我做了瑞士-吉姆萨染色,原位的话,首先挑出集落于波片上,然后用醋酸纤维薄膜压片,然后甲醇固定,再染色,染色5分钟,可以立即观察,也可封片以后再看。

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藤椅
发表于 2009-7-13 14:12 |只看该作者
一般培养CFU-GM采用琼脂半固体培养方法9 m# L1 o. [/ x9 r1 b% i
培养CFU-E/BFU-E/CUF-Meg/CFU-Mix采用甲纤培养体系!
: t" e: i6 s' [6 z! ]+ Z" ?) e具体要求实在内容太多!要写一本书了!
$ k$ ?) b3 d# K: v, C染色方法也是一样!
9 f9 f9 |. C* f" r具体看你要作什么!你的问题太笼统!不好回答!
' i8 |/ x! q6 K祝你好运!

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沙发
发表于 2009-7-13 14:12 |只看该作者
培养液PH.7.0-7.2为好
1 G$ d/ G% Q9 C& Y  _" ~血清.马血清.牛血清.人血清.培养造血祖细胞以健康马血清为好.切忌使用蛋白沉淀物质的血清
) F5 _: f0 F1 H. O; L- _7 b刺激因子要严格遵守各类刺激因子的制作程序
" o6 s0 v6 O( w/ C5 g' O" A支持物.包括琼脂和甲纤及血浆凝块等.要注意浓度的控制和加入支持物时的操作手法.0 W1 n. Y* N3 X* u% n5 v# e
温度湿度及CO2要恒定.
3 D) K1 B& \: C* Q2 i最好做预实验.检测培养液.刺激因子.琼脂及器皿等是否合格.
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