请问造血集落培养的相关问题

ye1018

求助：造血集落培养时应注意什么，琼脂和甲纤那个好些，我做染色怎么做

细胞海洋

回复 verakiww 的帖子8 Q; J4 d5 e2 U/ _! [% I1 h
% a: c! T+ _# R/ m  j
有问题直接在论坛发帖吧

verakiww

回复 wuweitmc 的帖子
* k, y1 V6 n$ u5 ?0 _
/ G# ?( I# J; e) j: \0 s你好 我看了你的造血干细胞集落培养的回复 很想加你qq向你请教 可以吗 万分感谢！我的qq357894999  希望你可以方便加我 谢谢啦

农夫有点田

回复 wuweitmc 的帖子
$ K0 x, S1 I  A9 _; b
5 O* X& d4 Y. R' n* B4 ]- ^您好厉害 得多多向您学习5 v  G) Q1 E/ Y! V

C_H_Yuen

回复 4# wuweitmc
; y/ q4 {! y* e1 E% ~: `- w$ N4 \, m
7 f; a. P3 U2 F9 B- B: [: U) P% L- v8 C% C+ Y3 n2 O" v
    有没有造血干细胞的镜下图片？？

lyj-0017

4# wuweitmc
: M: W; ~5 W4 n5 a4 Q# y. W- F% t" R( t. @3 Y

4 Q& o$ i+ T2 G8 s- m这位大哥怎么联系，我现在就是要做集落的培养，想多向你请教一下如何操作，能否留个联系方式那？

wuweitmc

一看就知道是新手，我来说说，我做了一年的集落培养。
) {# S* I6 A3 g) a6 l造血集落的培养也叫半固体培养，常见的有甲纤、琼脂和血凝块培养。各有所长，甲纤培养可以一劳永逸，使用时拿来就能用很方便；而琼脂就不那么方便了，现用现溶，并且操作时要眼疾手快，否则前功尽弃；你如果做琼脂培养我再给你详细说说，到时联系我。并且做HPP-CFC时，用琼脂培养容易些，虽然文献报道可用甲纤培养，但我没能培养出。* E. o/ @2 f* ?/ R3 B/ r" e
培养时注意的问题很多，我在前些时候也说过，在重复一下，归纳起来有如下几点：1.做甲纤培养，混匀时动作轻柔，避免起泡，起泡后影响集落形成；另外甲纤一定最后加入。8 w/ j. G. s3 M! x* F  n
2.种完体系后，别忘了，在孔周围加点无菌蒸馏水，防止培养过程体系水分丢失，水分丢失体系易干影响集落形成，因为培养集落时间一般在7天左右，甚至21天，mCFU-GM 7d,hCFU-GM 14d,CFU-E 3d ,BFU-E 14d CFU-GEMM 14d ,HPP-CFC 21d.( J; g5 ~5 C' P
3.培养HPP-CFC要用琼脂来做。我用甲纤做过，不长HPP-CFC，反而长CFU-GEMM，同样体系用琼脂做，可获得HPP-CFC，做BFU-E,CFU-E时，甲纤做的很好，集落很漂亮。琼脂做集落关键掌握手法，琼脂不能太热，太热细胞易被烫死，太凉不凝，加时边加边摇匀。
" n2 ~: I2 }9 I8 C4.血清的选择也很重要，有的血清适合做红系，有的适合做粒系，所以首先要知道你要做什么集落，选择适合的血清。 ) @! X! j" q. B5 w- h
染色，你说的太笼统了，集落染色有很多种，例如：吉姆萨，瑞士－吉姆萨，联苯胺染色。最近我做了瑞士－吉姆萨染色，原位的话，首先挑出集落于波片上，然后用醋酸纤维薄膜压片，然后甲醇固定，再染色，染色5分钟，可以立即观察，也可封片以后再看。

玉米卡

一般培养CFU-GM采用琼脂半固体培养方法9 m# L1 o. [/ x9 r1 b% i
培养CFU-E/BFU-E/CUF-Meg/CFU-Mix采用甲纤培养体系!
: t" e: i6 s' [6 z! ]+ Z" ?) e具体要求实在内容太多!要写一本书了!
$ k$ ?) b3 d# K: v, C染色方法也是一样!
9 f9 f9 |. C* f" r具体看你要作什么!你的问题太笼统!不好回答!
' i8 |/ x! q6 K祝你好运!

玉米卡

培养液PH.7.0-7.2为好
1 G$ d/ G% Q9 C& Y  _" ~血清.马血清.牛血清.人血清.培养造血祖细胞以健康马血清为好.切忌使用蛋白沉淀物质的血清
) F5 _: f0 F1 H. O; L- _7 b刺激因子要严格遵守各类刺激因子的制作程序
" o6 s0 v6 O( w/ C5 g' O" A支持物.包括琼脂和甲纤及血浆凝块等.要注意浓度的控制和加入支持物时的操作手法.0 W1 n. Y* N3 X* u% n5 v# e
温度湿度及CO2要恒定.
3 D) K1 B& \: C* Q2 i最好做预实验.检测培养液.刺激因子.琼脂及器皿等是否合格.