
- 积分
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- 威望
- 6
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- 45
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再谈谈个人的一些经验:- `! |0 K P# F w) ]3 x
1 在用等密度梯度离心法分离MSC时,一般取白膜样界面层细胞(单核细胞层)即可获得MSC, 其实在接近界面层的上层细胞(约1-2mm)仍然可以获得MSC,只不过相对较少而已;而在接近界面层的下层细胞就很难获得MSC了.这样,如果不想多做原代的战友就可以使用这种方法,多取些接近界面层的上层细胞进行培养.
& f5 n$ e( N. X f" `2 V, Y H( V2关于兔MSC的获取:' y! F, Z" ^8 B9 A+ C6 T
将新生日本大耳兔(10d左右)断颈处死,75%乙醇浸泡5min,无菌条件下取四肢长骨,在D-Hanks平衡盐溶液中清除骨表面的软组织及骨膜,去除骨骺,用α-MEM培养液清洗骨干部2次, 然后在α-MEM全培养液(含15%胎牛血清,青霉素100U/ml,链霉素100μg/ml,25mM HEPES,pH7.0~7.2)内,将骨干纵行刨开,轻刮骨髓腔至颜色变白,用尖吸管(5ml空针、25号针头)吸取培养液反复冲洗骨髓腔面,收集冲洗液,用细胞筛网过滤,去掉骨碎片, 1000rpm离心5min,沉淀物加10ml培养液悬浮,血细胞计数器计数,使悬液含细胞数为1×107个/ml接种,孵育80分钟后第一次换液,轻轻冲洗未贴壁细胞;以后每2-3天换液,7天后可以传代,2代以后细胞即可纯化.这样获得兔MSC细胞增殖分化能力都较好,可以传30多代,仍然保持干细胞特性
]# o9 k [0 F+ T4 X1 Z( p3 关于山羊MSC的获取:采用Percoll离心,2400rpm,30min的效果最佳. |
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