骨髓间质干细胞分离培养纯化经验交流!!

无敌金刚

人骨髓基质干细胞的鉴定：
' F" V4 d: [+ J0 x: B+ V形态学特征 纺锤形细胞) l2 U( ?: d9 `# p
细胞组织化学特征 碱性磷酸酶弱阳性 糖原染色强阳性 a-醋酸萘脂酶阳性 过氧化酶阳性 I型胶原表达阳性$ \! W9 E% V$ @
细胞表面特征：阳性：CD 44 50 54 56 58 102 106 166
: v4 v8 u: N  e7 |; y阴性：CD 3 4 5 14 15 34 45 HLA-DR等等

无敌金刚

书上说培养用低糖的DMEM,楼上说成骨诱导要用高糖的DMEM,难道向成骨诱导要改用高糖的DMEM？另细胞表面抗体检测全套抗体购买太贵，不知哪里可帮做呢

无敌金刚

不错 的确要换
' c0 U0 Z+ X! g; E详见 杨志明《组织工程》P126－129
9 s# F' W- q. ]  \' |5 r抗体检测就要看不同的分子生化实验室购买的抗体情况了3 b4 [) p+ X! `3 J: c% _# B* Z
不过上面的多数比较常规 大型生化室应该有

无敌金刚

谢谢主任，直接早期贴壁分离纯化是很实用的，但是否有将这样处理的细胞作过表面标志测定呢，那样似乎更能说明该方法的优越。

无敌金刚

再谈谈个人的一些经验:
7 [  s4 Z6 y: X$ C5 g( M1 在用等密度梯度离心法分离MSC时,一般取白膜样界面层细胞(单核细胞层)即可获得MSC, 其实在接近界面层的上层细胞(约1-2mm)仍然可以获得MSC,只不过相对较少而已;而在接近界面层的下层细胞就很难获得MSC了.这样,如果不想多做原代的战友就可以使用这种方法,多取些接近界面层的上层细胞进行培养.
; w+ v4 y1 o3 I7 J2关于兔MSC的获取:% J; Y& B8 Q3 u1 Z8 J
将新生日本大耳兔(10d左右)断颈处死，75%乙醇浸泡5min，无菌条件下取四肢长骨，在D-Hanks平衡盐溶液中清除骨表面的软组织及骨膜，去除骨骺，用α－MEM培养液清洗骨干部2次， 然后在α-MEM全培养液（含15%胎牛血清，青霉素100U／ml，链霉素100μg/ml，25mM HEPES，pH7.0～7.2）内，将骨干纵行刨开，轻刮骨髓腔至颜色变白，用尖吸管(5ml空针、25号针头)吸取培养液反复冲洗骨髓腔面，收集冲洗液，用细胞筛网过滤，去掉骨碎片， 1000rpm离心5min，沉淀物加10ml培养液悬浮，血细胞计数器计数，使悬液含细胞数为1×107个／ml接种,孵育80分钟后第一次换液,轻轻冲洗未贴壁细胞;以后每2-3天换液,7天后可以传代,2代以后细胞即可纯化.这样获得兔MSC细胞增殖分化能力都较好,可以传30多代,仍然保持干细胞特性
( J* K# V$ C3 v' J3 关于山羊MSC的获取:采用Percoll离心,2400rpm,30min的效果最佳.

missyoudad

磁珠分选的纯度也不会很高啊

nana0212

学习了，对于我这个新手很有用！希望更多的人学习和交流~

why121

受益了 不过还是不太明白早期贴壁分选的是具体操作 能指教一下吗？

anqi

各位总结的很好，受益匪浅，常来这里看看真能学到不少东西

呆呆鱼

受教了，不过好像我看到的文献里面用Dexamethasone诱导分化成骨细胞都是10-7M或10-8M，无敌金刚给用量好像太高了