I型胶原酶消化脂肪，提取间充质干细胞过程中，这些间充质干细胞是不是处于饥饿状态呢

sports123

I型胶原酶消化脂肪，提取间充质干细胞过程中，用PBS配置的胶原酶消化30-60min过程中，这些脂肪中的间充质干细胞是不是处于饥饿状态呢，会不会对细胞以后的状态有一定的影响呢？求大神指点。

sports123

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( z2 v2 [  c) V6 X7 v
) r" }2 @, V0 B8 A4 U恩恩，谢谢，我们现在用DMEM配，用起来也不错

Amy1114

我们用的胶原酶是用汉克斯液配制的（Gibco的说明书上就是这么写的）。因为汉克斯液里含有葡萄糖，对细胞有营养作用，所以还好。( _" G+ Z: K) s. `
另外脂肪组织取到过后应在4h内处理完毕，得率较高。4°C保存。1 G- _) ~- {6 b5 l" [4 z( P% ~3 i
再有就是，离心的时候建议用低温离心机，4°C离心。& g5 S1 o+ N8 c8 ~! f2 m
3 C( ]. i& {5 g9 e$ K& d' ]7 a
但是胶原酶消化的时候温度一定是37°C哈

rzghc

回复 sports123 的帖子: T! E- T% N& f* W6 n
7 f5 m! O  N3 c  d! C* A
这个倒是没做过实验，以前看文献是有加血清终止，配置不用加的

sports123

回复 rzghc 的帖子
0 |2 e! P4 k: r. C" X
% M' i; G7 ]5 s4 j血清可以终止胰酶，但对I型胶原酶是没有终止作用的

rzghc

回复 sports123 的帖子+ D; ^7 n( S. v9 ]  |
3 K: r. v5 C$ ]: Z+ B1 K0 o* r0 e
加血清就终止消化了，不要加

sports123

回复 rzghc 的帖子/ e' O8 N, c2 [1 K) v  A, E
% Q& F2 Z; j# x6 S6 b/ Q9 D
请问，用DMEM配置胶原酶还需要加血清吗？

rzghc

: S) C( w2 l5 ?
% ]: d( f: F! y5 U
本身新鲜的脂肪组织中就有各种结缔组织、血管、祖细胞提供营养的，消化过程中主要还是胶原酶对细胞的影响大一些，想要消化过程中活率高一些可以使用dmem配置胶原酶，或者可以低温过夜消化组织，不过pbs配置的胶原酶消化完后细胞活率稍低杂质稍多但并不影响后期培养。

sports123

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! ^' E5 P/ i6 A) [& v3 C9 O% d, Y4 _! @+ j) i* M3 N9 ]
在消化的过程中(30-60min),细胞没有接触到任何营养物质，细胞会不会处于饥饿状态呢？

爱学习的青年

为什么会觉得细胞处于饥饿状态