关于血液加入到淋巴细胞分离液中的问题

wzs1985

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* O& v# U& ]! S
% u2 ^0 _# F& e% V* O对的，  抱歉弄错了。
4 x2 A* [0 F( @( h; A1 U或者1比1也行。

Mrhydra52613

回复 gsg040222 的帖子
3 b4 }/ L) W: D+ y$ a# L+ D& r  k
效果怎么样？话说你们实验室离心速度一般用多少的，我看论坛里这方面的差别还挺大的

long3390hai

回复 gsg040222 的帖子
2 `: p; ?/ z  @, s
3 r" f0 C% H- L8 _; Q9 w  X7 N6 M* f1、离心血液，去血浆，加等体积盐水稀释。
7 P3 }  Z! f/ ]8 T9 E5 ]2、混匀血液样品，在加好淋巴分离液的离心管（淋巴分离液：血液=1:1.5）中，沿管壁加入血液样品，先在管壁涂好一条通路，然后缓慢加入，保证液面不被冲破。& r7 s3 S' K- d- D
3、离心转速慢升慢降。1 A' n" E  v  m, F) k
4、离心之后，取其上清，在白膜层上方1cm，和下方1cm，全部取出。加盐水混匀，注意盐水和取出液体的比例大于2:1，这样有利于提取PBMC。

gsg040222

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" k9 M  t# v. W) [; o; U( y% ]9 G) S. h: H% z- o; N
谢谢

gsg040222

回复 Mrhydra52613 的帖子: e9 S& c3 R  o$ S
6 w  |+ q8 U- s6 k" v5 Y( Z& |
效果还是挺好的，我之前离心的话用的是3000r，效果还是挺好的，但是还是想更好点

gsg040222

回复 Mrhydra52613 的帖子7 ~3 v4 e0 E- Z
) @  X: v6 a  Q2 k1 G
恩恩  ，就是要这个，非常感谢您

jxsese

加分离液时候要小心加入，一定要加到管底，不要沿着管壁加，另外每一种分离液用量都不一样，我们的一般都是稀释血液2：分离液1的量来加的，加的时候一定要调小移液枪的打出速度，第一个10ml越慢越好，后期可以适量加快。

wjh四月

全血离心后去掉血浆，加生理盐水补到原来位置，混匀，混匀后的血与淋巴液1：1加入。离心。15ml离心管效果更好

gubingxia

1盐水充分稀释（比例大于1:1）+ w( h; {8 Z# B( _  B* e
2重悬混匀（不能有团块）. D2 S: x2 P4 J6 I6 J/ E
3血液与分离液比例1:1# c$ U4 C! M% V1 ]! U# k: T
4离心管倾斜45度左右，刚开始必须缓慢加液，先用吸管勾勒出缓冲通道，向上提一下，不能让血液直直的冲下去，冲力过大会冲破分界层，分界层建立后加液速度可逐渐加快，随着液面升高离心管慢慢直立起来，因为分离液有毒，要尽量减少与血液的接触时间，还要防止时间过长红细胞沉降
$ j% b/ _9 F) h' ~, e( Q5离心升10降19,600G  H5 H2 C$ ~9 w% f) E
6取送离心管的过程要小心翼翼，不能晃动，以免打乱分界层。! e5 _8 P) g/ f6 n' ^
7可以先把上层浅黄色的血清吸走，留约3mm左右，眼睛的视线要与分界层平行或者从下往上看，以便更好的观察分界层，用吸管紧挨液面缓慢转着圈吸白膜层，边吸边轻轻移动，直到肉眼看不到有白膜层，尽量少吸白膜层以下的液体1 @: h: ~/ `$ Y7 T  |! P0 Y
8加盐水洗涤充分，离心洗涤3次，第一次1800r,5min,第二次1600r,5min，第三次1400r,5min4 G1 d! u$ T. I% m  y
9培养% |$ @# R. t" m* g5 J! D5 a
我们就是这么提取的效果不错，希望对你有所帮助。离心力可能会因为离心机的品牌不同，参数也会不一样，这个要根据实际情况来调整。我们用的是四川曙光 的离心机

曦馨橙子

感觉稀释液可以多加点，混匀，不要有血块~