大鼠全骨髓培养法为何看不到细胞贴壁??培养液也不见混浊和变色

bimuyu

转自dxy精华贴5 c; z( x' l: |
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我养的是wistar大鼠的骨髓干细胞,现在做了好多批,总也不见细胞贴壁,心情恶郁闷,我用的是dmem和f12加15%血清,开始怀疑血清不好,后来换了两种了,还是一个样子,我的细胞接种后看细胞活性是挺好的,但就是不贴壁(养三天不换液也不贴壁),培养液也不见混浊和变色,请高手帮我想想办法吧!

bimuyu

可以用涂胶的培养瓶增加细胞的贴壁率

bimuyu

我养了小鼠的，接种后24小时就有贴壁了，我用的α－MEM培养基和20％小牛血清

bimuyu

i am also culturing mouse mesenchymal stem cell but i am feelling frustrated for they don't grow well after passage 0

bimuyu

我也在养大鼠的MSC方法与你一样,24小时后就贴壁了,我用的是一次性的塑料培养瓶,但细胞形态不好,传代后状态越来越差,我想请教各位是不是大鼠的不好养啊

bimuyu

我在做wistar大鼠的骨髓干细胞，用的是α－MEM培养基和20％小牛血清（Hyclone）24小时贴壁,一次性的塑料培养瓶（Hyclone）,原代培养时采用直接贴壁法，效果不错，5*105密度接种。以后随着换液可以去除非贴壁细胞而达到纯化的目的。

bimuyu

个人认为:1)血清问题不大.如袋装现配请考虑ph值.& h4 P9 [" v3 V+ G$ B1 y5 i' w! H
2)动物多大,一般动物越小,细胞活力越好.
% y( K# d1 {$ S8 N# y3)取材过程顺利吗?考虑血凝的问题了吗?
: `/ S& _  T* E. `9 w4)培养瓶问题.建议用带滤膜的塑料瓶即可.
/ ^) E) a1 V7 X. r5)全骨髓培养法一般显的培养液较浑浊,只是无细菌污染.你所说培养液也不见混浊和变色,我认为是离心后培养,就应考率离心的问题了.9 y  \, R" Z+ _. c5 K
6)初次加培养液过多.建议薄薄一层即可.+ a5 g% \2 D* \* h( }' j% s; r- O
7)处次移入杂细胞过多,占据贴壁空间.建议每天观察时加以摇晃.! |% b+ y1 @+ W; \& t$ g: l
8)孵育箱的问题,可能性近乎零., n3 V* C4 O; T  }3 c
9)建议处次换液采取半量.$ q# J! ]9 H5 x" @
10)观察用显微镜的使用问题.7 c6 O3 L9 Q9 v8 y5 i7 q
11)吸取细胞时试管过火后的温度是否过高.0 T0 ^& a5 x. m+ s
大鼠全骨髓培养法我作过很多次,都比较成功.此实验要求细心和耐心.
1 Z  _' C* s7 M4 M9 V. f祝你好运

bimuyu

每天摇晃不妥吧？！严重影响贴壁！！！, t2 a6 z! c! |2 ~6 [& ~

4 d5 R) M* h/ D, H- r正确的做法是：
0 h  F1 O& ?5 n, F9 `接种时密度低一些，放置培养箱完全静止两天，然后PBS轻轻冲洗，换液，" r7 e  s8 ]& K" r8 X9 M0 T+ J$ A& k
OK，你就可以看到MSCs了！！！5 P" {; Y) V  B
我先后用全血法和Percoll分离法养过大鼠 小鼠 兔子 绵羊 成人 人胎儿MSCs，都比较成功。
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( d+ I3 X0 W" g, y2 I祝顺利！

bimuyu

请问全血法和Percoll分离法养的兔子 MSCs有什么区别吗，生长特性有不同吗

bimuyu

接种细胞后不要总看，要有耐心，我们实验室培养人的MSC就是三天 才看一次，开始也是灰心失望，但在一周后奇迹终于出现了。所以强烈建议多放置一段时间。祝实验顺利！