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以下是本人在综合园子里的各方经验，阅读Sigma的说明书，考虑实际操作需要上总结的。注意各个文献所使用的试剂的实际浓度有出入和计算单位有不同，另注意溶剂的浓度和对实验的影响。
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' q; @ M$ k9 x3 L3 U8 P材料：DMSO 2N盐酸（此时大多数人的答案，N 是 克当量) 无水乙醇 # H6 T5 @' q& R4 F( o& n
消毒好的1毫升EP管 微量加样器 消毒好的小青瓶
7 m# t$ J" e1 k# |消毒好的一次性小滤器，有机系滤膜（消毒前放入滤器一起高压消毒，本人使用尼龙膜），也可以购买一次性的有机系小滤器
6 }5 F$ Q* V0 j一次性5毫升注射器 电子天平' U% e: G9 Q, t! r" \) t
: s8 m, c) O9 i- U! o) W胰岛素干粉： 2mg加1ml水(盐酸调节水为PH 2.0)( 此为说明书所写），保存温度：-20度。7 n/ i, t/ d% `8 n. N* K/ }
1.10mg溶于5ml pH2.0的盐酸溶液，浓度为2mg/ml。过滤。' B! f5 K2 N" n5 h9 I% Q
2.分为20份，每份0.25ml含0.5mg，分装在EP管里，保存在-20度。# n: O8 A6 F" [# ?
3.取2份即1mg加入100毫升培养基里，终浓度为10mg/ml。（盐酸为0.5ml.本人已证明对100毫升pH 为7.4的培养基的pH不会有明显影响）
( B: H& g8 Z8 L( G* d% G$ l ]9 G; o9 I3 z
非水溶性地塞米松干粉（分子量为392.5）：保存在2-8度，在无水乙醇中不需加热溶解度是25 mg/mL 。5 W5 s1 h4 w/ a0 L
1.电子天平称取3.925mg溶于5ml 无水乙醇，浓度为0.785mg /ml=2mMol/L。过滤。$ M" `& w. ^; g u8 x
2.分为100份，每份50微升含0.03925mg，分装20份（余下的使用前再分），保存在-20度。/ j6 v5 T) r3 x
3.取1份即0.03925mg加入100毫升培养基，即终浓度为1M。（无水乙醇为50微升）如果是水溶性的则方便。
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. N# K& K& P( R! i+ EIBMX干粉：保存在-20度，在室温下也是稳定的。It is soluble in 100%DMSO at 1 M with gentle warming.
2 N% t. ~# f- ^0 _: x# x6 f, B& _1.99.9mg（实际包装是100毫克，故是100毫克）溶于2.7ml DMSO中，浓度为55.5mg/ml，过滤。
. `; k/ u t' z! B7 b2.分为18份，每份为150微升含5.55mg。保存在-20度。
+ m( F$ ?( @' J9 i, |, ?& v1 A5 a# @7 K3.取2份即11.1mg加入100毫升培养基 ，终浓度为0.5毫摩尔/L。（DMSO为300微升。可惜稍微多了点。）
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以上三种同时加入到100毫升的培养基内，配好的诱导培养基如果短期内用不完，同理分装冷冻。* }# Q6 J& e- U: F9 a
本人全部过滤，考虑到在称取试剂时很难无菌操作，进口分装试剂本身和溶剂本身的无菌状态难以肯定。但过滤时滤器会损耗溶液。
) K) W; R( |' {: ~ Q) `. ~, O" f9 d& i---------
5 I8 }0 R3 T2 {! J5 B请使用前阅读Sigma的说明书。个人操作共同分享，恐有不当，仅供参考。 |
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发表于 2009-8-4 12:05
