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以下是本人在综合园子里的各方经验，阅读Sigma的说明书，考虑实际操作需要上总结的。注意各个文献所使用的试剂的实际浓度有出入和计算单位有不同，另注意溶剂的浓度和对实验的影响。4 f m/ D p% ]
5 ^/ F2 `8 c! `0 B# t0 b1 c9 a# R2 L4 Z材料：DMSO 2N盐酸（此时大多数人的答案，N 是 克当量) 无水乙醇
4 y* A1 i7 c8 X; r( c! Z N/ d T' ~消毒好的1毫升EP管 微量加样器 消毒好的小青瓶 1 |2 b# N( g" p
消毒好的一次性小滤器，有机系滤膜（消毒前放入滤器一起高压消毒，本人使用尼龙膜），也可以购买一次性的有机系小滤器
* {- v% U+ c7 O: O一次性5毫升注射器 电子天平: p0 E1 s k/ M
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胰岛素干粉： 2mg加1ml水(盐酸调节水为PH 2.0)( 此为说明书所写），保存温度：-20度。& u; [: m% |$ O: F4 l" U
1.10mg溶于5ml pH2.0的盐酸溶液，浓度为2mg/ml。过滤。* N5 v ]6 D) a7 h/ I5 f) v
2.分为20份，每份0.25ml含0.5mg，分装在EP管里，保存在-20度。
0 C8 ^" m5 v- z5 U- [7 d* w3.取2份即1mg加入100毫升培养基里，终浓度为10mg/ml。（盐酸为0.5ml.本人已证明对100毫升pH 为7.4的培养基的pH不会有明显影响）6 w5 I" o2 R/ g$ O! K
1 S. H& t1 U) |- u' g! k
非水溶性地塞米松干粉（分子量为392.5）：保存在2-8度，在无水乙醇中不需加热溶解度是25 mg/mL 。 Y4 T3 G4 v3 i. f; @. @! t
1.电子天平称取3.925mg溶于5ml 无水乙醇，浓度为0.785mg /ml=2mMol/L。过滤。# _" z- T. t8 _% K' R1 j% @
2.分为100份，每份50微升含0.03925mg，分装20份（余下的使用前再分），保存在-20度。
; F! @ `3 E) n8 c- E$ M0 |3.取1份即0.03925mg加入100毫升培养基，即终浓度为1M。（无水乙醇为50微升）如果是水溶性的则方便。
X) F& k- i, ?8 @6 n; N/ ^
/ \2 {8 W3 P2 j( g+ c/ CIBMX干粉：保存在-20度，在室温下也是稳定的。It is soluble in 100%DMSO at 1 M with gentle warming.! M/ }- K$ _3 Y: g1 a
1.99.9mg（实际包装是100毫克，故是100毫克）溶于2.7ml DMSO中，浓度为55.5mg/ml，过滤。
5 E, p! M7 c) j; c& p6 G; S L2.分为18份，每份为150微升含5.55mg。保存在-20度。
) f5 `7 ~% b0 C* I6 `3.取2份即11.1mg加入100毫升培养基 ，终浓度为0.5毫摩尔/L。（DMSO为300微升。可惜稍微多了点。）/ }* f4 x! ~+ l* Y, Y3 c1 r0 t
! Y$ @3 ]& d$ T1 _ j# F- V以上三种同时加入到100毫升的培养基内，配好的诱导培养基如果短期内用不完，同理分装冷冻。1 B9 R) Q2 p. V* P9 x4 A5 [- o4 ~' K! o
本人全部过滤，考虑到在称取试剂时很难无菌操作，进口分装试剂本身和溶剂本身的无菌状态难以肯定。但过滤时滤器会损耗溶液。3 L5 I4 m: S2 z) n% G. T
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请使用前阅读Sigma的说明书。个人操作共同分享，恐有不当，仅供参考。 |
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发表于 2009-8-4 11:59
