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以下是本人在综合园子里的各方经验，阅读Sigma的说明书，考虑实际操作需要上总结的。注意各个文献所使用的试剂的实际浓度有出入和计算单位有不同，另注意溶剂的浓度和对实验的影响。
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材料：DMSO 2N盐酸（此时大多数人的答案，N 是 克当量) 无水乙醇
- s' a! h3 i3 S) h消毒好的1毫升EP管 微量加样器 消毒好的小青瓶
# X+ l4 p: C' V; I% y消毒好的一次性小滤器，有机系滤膜（消毒前放入滤器一起高压消毒，本人使用尼龙膜），也可以购买一次性的有机系小滤器7 j( ]6 e/ p s- b7 Z) j/ i
一次性5毫升注射器 电子天平, P. P& E) ^9 f( ~3 L& g
# Z4 b# W( B2 f' b胰岛素干粉： 2mg加1ml水(盐酸调节水为PH 2.0)( 此为说明书所写），保存温度：-20度。3 X1 ~$ d( N& Y# M1 C/ a9 R
1.10mg溶于5ml pH2.0的盐酸溶液，浓度为2mg/ml。过滤。, `% a# p( r1 F) {
2.分为20份，每份0.25ml含0.5mg，分装在EP管里，保存在-20度。
- i3 M4 u' G" u3.取2份即1mg加入100毫升培养基里，终浓度为10mg/ml。（盐酸为0.5ml.本人已证明对100毫升pH 为7.4的培养基的pH不会有明显影响）! S* j- N8 t {8 g- c* Y- X, _
* v% R; k* L) L; s5 m! W( l非水溶性地塞米松干粉（分子量为392.5）：保存在2-8度，在无水乙醇中不需加热溶解度是25 mg/mL 。! r4 }8 j& |) h5 ^8 \
1.电子天平称取3.925mg溶于5ml 无水乙醇，浓度为0.785mg /ml=2mMol/L。过滤。
( W" i% d/ M& t% r- H+ I6 z2.分为100份，每份50微升含0.03925mg，分装20份（余下的使用前再分），保存在-20度。
& ~/ |1 ^- D2 F I7 [& h3.取1份即0.03925mg加入100毫升培养基，即终浓度为1M。（无水乙醇为50微升）如果是水溶性的则方便。% k3 f T2 B& z1 t R. o$ @2 K5 A z
, A4 c6 h8 E0 j) x) b
IBMX干粉：保存在-20度，在室温下也是稳定的。It is soluble in 100%DMSO at 1 M with gentle warming.! `6 x3 C9 s" b3 r3 U' }
1.99.9mg（实际包装是100毫克，故是100毫克）溶于2.7ml DMSO中，浓度为55.5mg/ml，过滤。. p9 u& ]2 m4 g% k+ E& Z4 `
2.分为18份，每份为150微升含5.55mg。保存在-20度。 ~) h( f& h0 {, b1 S. q' H4 b
3.取2份即11.1mg加入100毫升培养基 ，终浓度为0.5毫摩尔/L。（DMSO为300微升。可惜稍微多了点。）
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- a( w P5 k$ O* a# X* w以上三种同时加入到100毫升的培养基内，配好的诱导培养基如果短期内用不完，同理分装冷冻。
9 P. z1 D9 i; y$ x h( Y. T本人全部过滤，考虑到在称取试剂时很难无菌操作，进口分装试剂本身和溶剂本身的无菌状态难以肯定。但过滤时滤器会损耗溶液。2 C) f4 h& w$ ]
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请使用前阅读Sigma的说明书。个人操作共同分享，恐有不当，仅供参考。 |
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发表于 2009-8-4 12:05
