“小二”归来——细胞复苏

泡沫清风

, z# h. p$ p& z; |0 n4 D; I
; n4 G3 X0 e7 r$ K4 G1 u9 M+ }不好意思，各位！由于我外出了几天，所以耽搁了！Sry！7 P+ `5 H1 N7 `8 H

  k0 Y7 ]( y$ o: e4 ~我是上周6早上复苏的细胞，但由于周末出去，所以没有空上网来发帖，因此把这三天的一起发上来啦！
) i4 ~1 Q. O" h1 B* q$ \& X4 q5 z, f
接下去几天的实验中，如果大家有什么疑问或者建议，请提出来哦！
5 ~- W1 j% @- K" H6 D2 E, y8 ~1 x8 h6 Z! H

' n% |& s+ L+ f0 y% P6 P* t5 q第一天还是复苏：2 @; \; |4 O4 F; a
实验准备：
/ ~: d& c6 d1 X" a$ W- t2 x( }4 y（1）DMEM：Gibco（高糖）  8 a4 H6 x6 B0 ?5 }! F' N
（2）FBS：HyClone  I1 v# L5 g  M, a2 M* N: J8 {
  培养用DMEM+10%FBS1 [0 J% V4 H- Q! s

+ X5 x! e8 v$ }9 J3 e实验步骤：4 \4 e# r  Y* M7 ^2 V5 M
（1）在15ml离心管中加入5ml常温的培养基（293T细胞怕冷，培养基最好在水浴或常温中放置一段时间）
* ]$ m, P0 e5 D/ G# V- D1 L（2）37度水浴复苏一支293T细胞
* V' g) S' s( C  b0 a4 s4 g4 \（3）将解冻的细胞液（1ml）转移至5ml培养基中，轻轻吹打数次9 |* }- Q3 p) H
（4）1000rpm 常温离心5min
- A4 n; A- X+ `. F! |) {2 h（5）在一个T75培养瓶中加入10ml培养基，浸润内壁。
$ z3 W) \7 I2 Z" g" @3 b" \（由于这支细胞冻的时候是根据T75的量冻的，所以直接复苏到T75瓶中）% s' {, `" |) C! |- B# v  A& f
（6）离心完，弃上清，加入新鲜的培养基5ml重悬，轻轻吹打数次。接种至T75培养瓶中，轻轻摇匀。9 c& e$ x& n) P$ ?
（6）放入37度，5%CO2温箱中培养。（培养瓶盖勿拧紧）

hualin840518

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sajia

学习

鹤之舞

1# 泡沫清风 4 I4 ]- Z3 n+ b( ~

9 R# Q/ l2 C* i6 V8 s# V7 Q; I7 T6 v* w9 u, y8 H' N. }: D/ S
非常感谢

joicie

支持~~~~~

mmssyyee

冻存的时候一管里有多少细胞啊？加入5ml的培养液会不会有点多啊？

泡沫清风

回复 6# mmssyyee
2 q) C" t; t" S0 T9 b1 z" `0 Y细胞数3*10^6左右，具体不清楚了。我都是凭感觉冻，不怎么计数。
# `. V( r/ O2 _9 x一般复苏细胞的时候用3倍以上的培养基复苏

mmssyyee

回复 7# 泡沫清风
: h! ^: G$ R8 g, u2 H0 x0 F+ B+ ]

! R) ]4 j" P) @! b* i6 n    谢谢！

camel_stone

一般我组复苏细胞，会在一分钟内使其完全溶化，所谓慢冻速溶。

dlhhhhh

我来顶顶、、