“小二”归来——细胞复苏

泡沫清风

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8 B+ A- r8 f2 J
不好意思，各位！由于我外出了几天，所以耽搁了！Sry！
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我是上周6早上复苏的细胞，但由于周末出去，所以没有空上网来发帖，因此把这三天的一起发上来啦！
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6 ?! D$ q8 ]$ ^* b# R2 y, w接下去几天的实验中，如果大家有什么疑问或者建议，请提出来哦！! h9 o" A0 M' T) X: Z! e$ Y1 A
1 N  R' D8 ]: c* j3 H" V. q

' H0 D  [" `' v; P第一天还是复苏：! [7 N8 l" x" i* ]( J
实验准备：
0 _, a: R7 k3 D（1）DMEM：Gibco（高糖）  ( p; v* u8 g6 G, U' [) `
（2）FBS：HyClone
1 c0 u# I+ D7 w: _, R  培养用DMEM+10%FBS
* v* f& j9 o. z7 x. E2 h+ \& i# [# b& ?" m
实验步骤：
/ |9 a$ Y. l; d% M  Y（1）在15ml离心管中加入5ml常温的培养基（293T细胞怕冷，培养基最好在水浴或常温中放置一段时间）
+ ]$ n7 v( u* w9 ^1 v5 A8 t0 A（2）37度水浴复苏一支293T细胞
* r# Y7 l. O* b（3）将解冻的细胞液（1ml）转移至5ml培养基中，轻轻吹打数次# ~! x2 w; O1 x2 `0 J! z$ A
（4）1000rpm 常温离心5min9 O$ ?/ C' J2 Q# e. X% ?# b
（5）在一个T75培养瓶中加入10ml培养基，浸润内壁。, ?- }2 ]# C. {% X" I% ^
（由于这支细胞冻的时候是根据T75的量冻的，所以直接复苏到T75瓶中）
2 H+ K- s; M1 Z4 p（6）离心完，弃上清，加入新鲜的培养基5ml重悬，轻轻吹打数次。接种至T75培养瓶中，轻轻摇匀。
2 t" @& m. j8 R% ~0 {% T) V（6）放入37度，5%CO2温箱中培养。（培养瓶盖勿拧紧）

hualin840518

顶

sajia

学习

鹤之舞

1# 泡沫清风 8 w6 e6 Y) O# w3 d
9 P6 Y$ F; w$ ?2 m3 ]8 ]8 a
7 k6 d( m6 V% i9 P8 {
非常感谢

joicie

支持~~~~~

mmssyyee

冻存的时候一管里有多少细胞啊？加入5ml的培养液会不会有点多啊？

泡沫清风

回复 6# mmssyyee 8 x1 i! h: _( H$ [! v/ Z7 s0 Q6 g$ c
细胞数3*10^6左右，具体不清楚了。我都是凭感觉冻，不怎么计数。
2 _5 \& O! T: Q一般复苏细胞的时候用3倍以上的培养基复苏

mmssyyee

回复 7# 泡沫清风 % m: g* s3 c1 T2 R

3 O8 ~, C) D& T; u- l- ]: K2 ^9 j5 M/ Q0 @2 ]
    谢谢！

camel_stone

一般我组复苏细胞，会在一分钟内使其完全溶化，所谓慢冻速溶。

dlhhhhh

我来顶顶、、