“小二”归来——细胞复苏

泡沫清风

2 G( m0 Z$ U% f4 q. S% }
3 S' \! i+ o9 H4 P7 {1 |& V
不好意思，各位！由于我外出了几天，所以耽搁了！Sry！# c3 M2 p4 e) g' }3 v, {

! s8 s8 t2 u+ X: k: `# i我是上周6早上复苏的细胞，但由于周末出去，所以没有空上网来发帖，因此把这三天的一起发上来啦！
/ O& y8 R1 z- A* Z, E4 P
1 |4 {  v+ {/ }4 M, G6 v* M接下去几天的实验中，如果大家有什么疑问或者建议，请提出来哦！
& \5 c3 f' I2 W" U
' `4 Y/ O6 X, P4 l& ?
4 v0 A5 |; Z  f% c0 D第一天还是复苏：
; I1 b3 n1 h1 x0 h1 W实验准备：! F( d! u8 X+ C$ r& H: F. [2 Q; X
（1）DMEM：Gibco（高糖）  
8 J+ l1 }9 B6 \8 j" ?（2）FBS：HyClone- r# g8 _4 \; I2 H9 |
  培养用DMEM+10%FBS1 F! {# b1 ?: ~; X
1 t: w7 a7 d1 N7 h. h7 i. P) B
实验步骤：
, L( Q! R! \$ y5 |3 t7 v" n) m（1）在15ml离心管中加入5ml常温的培养基（293T细胞怕冷，培养基最好在水浴或常温中放置一段时间）
' R" x) Z9 J4 N7 M8 x9 Q（2）37度水浴复苏一支293T细胞  ]; w1 \/ ]1 [5 l7 M
（3）将解冻的细胞液（1ml）转移至5ml培养基中，轻轻吹打数次4 y2 ^$ F0 I( y2 I, Q* b
（4）1000rpm 常温离心5min# e$ t9 g. p% f! e/ b
（5）在一个T75培养瓶中加入10ml培养基，浸润内壁。. l8 `' I$ {9 d; E. I" x
（由于这支细胞冻的时候是根据T75的量冻的，所以直接复苏到T75瓶中）
* R2 d" {# f6 D% Q) K1 W1 j3 E$ i（6）离心完，弃上清，加入新鲜的培养基5ml重悬，轻轻吹打数次。接种至T75培养瓶中，轻轻摇匀。' w$ i: h7 L. ]  F0 ?" ^
（6）放入37度，5%CO2温箱中培养。（培养瓶盖勿拧紧）

hualin840518

顶

sajia

学习

鹤之舞

1# 泡沫清风
0 y* J9 ?9 f# @4 X$ Z6 s1 L, n
  w; |) B4 z' v' p6 [- ]) p2 ]7 r& `- o5 l5 F
非常感谢

joicie

支持~~~~~

mmssyyee

冻存的时候一管里有多少细胞啊？加入5ml的培养液会不会有点多啊？

泡沫清风

回复 6# mmssyyee
; Y' ?" n/ ~+ S$ w& j细胞数3*10^6左右，具体不清楚了。我都是凭感觉冻，不怎么计数。
( O( K% d0 d# ]一般复苏细胞的时候用3倍以上的培养基复苏

mmssyyee

回复 7# 泡沫清风
3 Z3 D2 z) h4 k0 ]
) i. w8 H# X4 o5 U
% U# ?) y1 K! y( P7 D) [    谢谢！

camel_stone

一般我组复苏细胞，会在一分钟内使其完全溶化，所谓慢冻速溶。

dlhhhhh

我来顶顶、、