“小二”归来——细胞复苏

泡沫清风

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+ _8 _% P$ P) `& k/ X不好意思，各位！由于我外出了几天，所以耽搁了！Sry！% g& L$ }" Q# c6 y" ]2 e

! d, @2 k) x7 D我是上周6早上复苏的细胞，但由于周末出去，所以没有空上网来发帖，因此把这三天的一起发上来啦！3 i8 X) R, Y0 s  V0 u! E: W+ C) Z
2 p0 m: E4 s  Y# }
接下去几天的实验中，如果大家有什么疑问或者建议，请提出来哦！5 G3 g4 _  m) `% D, j" N; }/ o

$ X/ h4 ~' I! B# J9 n2 X8 p) }9 h6 K# C2 y1 j! G# ^
第一天还是复苏：
% c9 l0 X3 k0 I实验准备：7 h2 N$ }2 |- l
（1）DMEM：Gibco（高糖）  3 u2 Q  _( K: c! G, J7 o, U
（2）FBS：HyClone
2 T+ Y1 Z5 ]  C+ e  培养用DMEM+10%FBS
9 M2 n  e( d! k/ J, h4 O) H2 j" q: @3 ^: c8 k/ j" N
实验步骤：! B- r+ @" i0 b% z+ z" a. ]
（1）在15ml离心管中加入5ml常温的培养基（293T细胞怕冷，培养基最好在水浴或常温中放置一段时间）
3 E- L5 i, Q* [6 z! H6 [（2）37度水浴复苏一支293T细胞
, v: ~% [8 {3 g- [（3）将解冻的细胞液（1ml）转移至5ml培养基中，轻轻吹打数次# p9 l7 S8 b7 A' o
（4）1000rpm 常温离心5min
7 s- m" u6 R3 S9 x9 S0 W9 ^6 t/ X, b（5）在一个T75培养瓶中加入10ml培养基，浸润内壁。8 k; C0 r9 P0 ]4 N0 j6 I! C
（由于这支细胞冻的时候是根据T75的量冻的，所以直接复苏到T75瓶中）
$ N1 |% `3 ?% Z$ b! Q: R# M( R$ u（6）离心完，弃上清，加入新鲜的培养基5ml重悬，轻轻吹打数次。接种至T75培养瓶中，轻轻摇匀。7 I+ n. v  g9 M" ~+ @; R
（6）放入37度，5%CO2温箱中培养。（培养瓶盖勿拧紧）

hualin840518

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sajia

学习

鹤之舞

1# 泡沫清风
$ N& @! [! q5 ], d# w. r8 S9 x" ~9 q0 C* g' i. k4 I

4 ]) k% [  ?7 n3 r" C非常感谢

joicie

支持~~~~~

mmssyyee

冻存的时候一管里有多少细胞啊？加入5ml的培养液会不会有点多啊？

泡沫清风

回复 6# mmssyyee . G- U+ x3 _+ L) R, t/ A; x) x9 F' c: X6 ]; D
细胞数3*10^6左右，具体不清楚了。我都是凭感觉冻，不怎么计数。, }% h. g1 H# q' L$ K% h  K5 E
一般复苏细胞的时候用3倍以上的培养基复苏

mmssyyee

回复 7# 泡沫清风 7 H4 a5 H7 _5 G+ o' [

9 a, Q, a1 }. l+ o+ p. j6 p! Q9 H* G- Y
    谢谢！

camel_stone

一般我组复苏细胞，会在一分钟内使其完全溶化，所谓慢冻速溶。

dlhhhhh

我来顶顶、、