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泡沫清风

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3 b9 a. Q) v9 ]( c建议和问题都堆到这边来 ！这样便于查找和回答
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$ Z) b. C* z+ t. J3 h我先说一点：培养过程中，我没提到换液，说明就没有换液！一般细胞种上后我就放在那里不怎么去管他，等他长满了消化
6 _' ~0 ~4 \, r. X6 X+ ?( F因为有人问我这个问题，所以我先回答下，呵呵！

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# G  e1 ]" _8 p) l( ?/ ^# M; y' |: }8 b% H% l
have-a-rest 的问题：
" a5 M/ n* z( V1、我们的培养基买的是GIBCO的粉末，含丙酮酸钠3 Z/ e( @0 `* Z( u" u
2、双抗加不加依个人习惯，我培养不会污染，所以就不加了！而且包装病毒和感染的时候最好不要加双抗( O+ D2 M- g; o% F2 C' \1 D
3、我们以前也用过胰酶+EDTA，感觉太强烈，不利于细胞下次贴壁，293T细胞本来就是贴壁不牢的细胞系，0.25%的胰酶消化已经够快了，有些protocol还建议用0.05%的胰酶。还有专家建议胰酶都不用，直接吹就行，我们也试过，吹完了细胞碎片很多，背景很脏。吹打时间长是因为293T比较粘连，容易抱团，充分吹打成单细胞！

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/ r* j! @% f0 t2 L
' a# j- a& H4 [5 N
hualin840518 的问题：
( F8 ~8 T) G% F! }8 {- t& P9 h% L5 x1 \nikon的荧光显微镜自带的成像系统

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# ]) v- X0 V3 B' ]; Y9 e5 ^" q9 ^& K3 T3 c
mvirus008 的问题：9 f3 d: c  w; `+ Z1 A) q
可以不离心，确实也有人这么做，虽然是中和了，但是仍有残留，我觉得不好！
" V8 V; \3 R+ E- W9 I$ P而且不离心细胞碎片可能会多，背景比较脏
1 |. B( ]% z  j5 F3 U# \' ?美国那边的老师都推荐离心。

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难得胡涂-1的问题
" D& |9 c' q3 b6 w( s- @1 X293T贴壁本身就不牢固，你很难把握，稍微消化一会细胞就起来了！倒胰酶，容易倒掉细胞

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6# gemstone
( J2 M0 A' N7 L2 s& a, ]! X
$ j$ B# K% q5 r6 b呵呵，我上面说了，也可以用0.05%的胰酶！3 ~# f! X( d( U; v5 R
转染我后面会说的，我铺了poly-L-lysine,所以不太会飘。而且就算不铺poly-L-lysine，我们的细胞还是比较牢固的，细胞比较好

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8# wangming
8 U' h2 j* w) r5 ?7 I我没有用过GELATIN，GELATIN一般都是在培养ES时用于铺Feeder的吧。

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  _* ]5 M2 D* ]2 `& u( F$ t. V
! I" X: x& d1 o/ Z5 \7 U% U 10# sajia
3 O* i' [! d4 _& I2 l黄色的圆圈？应该是死细胞吧！
3 g  K% L( W2 Z, N长的怎么算好，长的好看就算好。细胞越伸展越好

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有图片吗？
9 z+ c8 g) Q" [$ ~/ N  Y. W+ f# @我估计是细胞太密了，是不是长成很大的圆圆的细胞？

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