关于间充质干细胞表面的的黑点的问题

gsg040222

最近培养的干细胞在显微镜下观察，发现细胞表面粘附有将近20个黑点，并且这个黑点只在细胞表面，培养液中没有发现，在高倍镜下观察，黑点是不动的，还有就是细胞的伪足比我之前培养的细胞长将近⅓，还有就是观察细胞时，每个培养瓶中都有几个细胞团，这些细胞团是细胞核聚集在一起，甚至在低倍镜下观察都是亮亮的一团，伪足更长，其他细胞长得也比较稀疏，细胞扩增也比较慢，观察到这个问题是在原代传代后就有，也不扩增，但是传代后，过一天黑点的数量又成这么多，不增不减。用的培养瓶，不透气的瓶盖，传代终止用FBS，求原因啊，麻烦大家了。

Amy1114

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我们也遇到过这种情况！师姐说可能是“黑胶虫”。( C, r" D( U1 O# j2 i( x2 ~7 v
我们把MSC培养到第6、7代的时候有时会出现小黑点，观察黑点不运动（如果是细菌污染应该看得到细菌很快游动）。% }+ _1 |* K& m0 R! C
考虑是胎牛血清的原因：黑点可能是支原体，也可能是杂质蛋白。9 s: V& U3 t9 F

0 q( ^0 n4 R$ G0 X5 G+ l* I细菌污染：培养基变黄，变浑浊
9 D& v7 I5 [+ ^0 A( r* n5 c支原体污染：培养基变黄，仍澄清7 H% i" ]5 z5 T. E
杂质蛋白：培养基不变黄，澄清
. }: G6 _  p/ H; z" p$ U+ s1 m进一步确认就需要买试剂盒来鉴定了。
4 T4 |; \5 i  J& v, h6 Y2 ~$ r' ~) R3 y. r8 z& K, I. E
胎牛血清操作的时候注意：1.使用前56°C，30min灭活。2.不能剧烈摇晃。( r! l5 F, O4 U, ?

saner

我养的也是这样，感觉脏脏的，几代都是这样，洗不掉，实验室的师姐和老师都不知道是什么

ltickp

应该是MSC排出的，细胞和培养基里面应该也会有小黑点的，且是静止不动的，论坛上好几个帖子都有人说是胎牛血清造成的，我们这边养的MSC基本都用胎牛血清，黑点几乎都有，只是量多量少罢了，细胞团应该是死细胞聚集成的团块物质，漂浮透亮，可能是接种细胞活率较低或者细胞汇合度较高的原因

caoyu2

学习一下

caoyu2

学习一下

阿秀哥

回复 zuishui 的帖子
3 ^) D3 N) p4 s3 T8 B8 E" p% }- P$ a" W8 ~2 i2 V
提纯没作用的了，只会越养越老

yeshch

首先，建议检测一下支原体，原代培养一定警惕支原体污染；其次，以前培养液中出现黑点也以为是污染，跟公司沟通之后发现培养基中蛋白物质含量不对也会析出黑点，所以建议查对一下你的培养基成分有没有问题；还有一个很小的可能就是老化的细胞中也容易出现黑点

fenglinzhu

回复 zuishui 的帖子. z# e+ h% U( T

# n& P9 G8 H3 Z  Q% A7 q( {9 }消化的时候不要把那种贴壁很牢的消化下来，老化的细胞一般贴壁都比较牢

zuishui

回复 阿秀哥 的帖子+ |: W4 b* x! e) _/ A: f

, Z8 s1 k( L9 ^* `+ _! a% U1 F老化了是否可以提纯啊，还是会越养越老化？