关于NK培养的问题

a1025002950

分离外周血得到PBMC来培养NK时，我把分离出来的血浆放在65度水浴半个小时，才发现温度不对，结果离心后的血浆呈果冻状，本来不想用这血清， 但是公司规定不能用胎牛血清，担心细胞又长不好，我就冒险加了一点 ，加完之后我就后悔了，细胞被那一团一团的东西包裹悬浮，不能与包被过的瓶底接触，这会不会严重影响细胞的增殖分化？有没有挽救的方法？  这都是粗心惹的祸， 请朋友们能提点建议，尽可能把影响降到最小

淘知路遥

水浴锅每次用完都要调至本实验室需要使用的最低温度，一般是调至37℃，每次使用前再调至所需温度。65度温度太高了，里面的蛋白质变性了，在整个培养过程中没有血清或血清异常会影响细胞总体增殖，分离出的细胞不会完全被包裹悬浮，剩下的还是和正常一样。培养几天团块会消失的，若不行可以拿移液管吸出来。

a1025002950

回复 淘知路遥 的帖子. I' K+ t  {  O; l. V4 X9 x
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我们灭活的温度本来是56度的，现在我不能过滤也不能吸出那团块，会带出那细胞的，# O& c' K4 Z+ v) w8 ^, g

a1025002950

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培养瓶底部有因子包被，细胞被包裹悬浮，不能接触到底部的包被因子，肯定会影响细胞的增殖分化

淘知路遥

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( M) f: f0 d& ]/ [9 ?0 q! \  e9 O过几天等细胞长起来了，那团块还在的化再处理

a1025002950

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2 I5 T# E9 l9 T5 }) E+ F细胞能长起来吗？
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淘知路遥

回复 a1025002950 的帖子0 H% k3 f) D3 v$ ?$ v7 x7 q1 E
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团块吸附细胞数量是有限的，你镜下看还有瓶子里还有较多散在的细胞吧，这些细胞不受影响，只是数量少了

淘知路遥

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9 L5 Y  m- H4 B. F5 L' W, t细胞会长，不加任何血清就是增殖慢，有健康健康脐血浆可以加点

lihaifeng

这种血浆是个别现象。解救办法就是赶紧把细胞吹吹 ，换个瓶子，血浆再处理处理再加，血浆呈液态，透明才可以加。

ltickp

还是其它的胎牛血清或者血清替代物吧，不然你可能赶不上收细胞回输的时间了