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目前最常用的挑单克隆的方法应该还是有限稀释法，最近在不断的重复种96板、看板、画圈，然后充满希望——失望——苦闷——重新再来的循环中。目前主要有以下问题：
; b% O) x" l* S) h+ O1. 常规中止消化再悬浮后多长时间将单克隆种完合适？我平常做的时候先传代，然后剩0.5ml左右种单克隆，因为要细胞计数然后又种5-8块板，感觉细胞在超净台里好长时间，会不会活率都不行了？有什么合理的种板个数及时间规定吗？6 F; k$ x2 B! X% X6 Y
2. 选择看板的时间？我试过4小时、24小时及36小时看板，可以确定的是4 小时单个细胞可以贴壁，但是常常来不及在4小时后全看完（因为种的板多，秉持着多了总有成功的想法，也不知道对不对），而且看久了眼睛好痛。然后就24小时或36小时看，可是这时候的细胞有的开始分裂了，怎么确定是一个细胞分出来的还是这孔里本来就有两个细胞呢？
, s3 G e6 }7 W$ Z3. 细胞长到什么程度传代？我查文献有看到说细胞20多个传代、100个左右传代的，我自己也试了试，20个的真的不靠谱，根本不长，100个的传代到24孔板，前2天长得还好，第3天开始就明显老化了，颗粒增多，然后5天就看不着细胞了。然后我想着是不是得在96孔板里再养养，就尝试一直养到第8天，细胞是多了很多，可是细胞状态又不行了，明显触角伸出来了，细胞也扁平变宽大了。怎么办啊？
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l z o' G9 i5 u真诚的请教各位老师、高手们，请给一点指导、一点意见，谢谢大家了！刚开始做实验，有很多不懂的地方，一些专业用语可能也不对，请大家多包涵
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发表于 2017-8-23 16:00
