细胞培养问答

细胞卡也

1 冷冻管应如何解冻？
- `2 g' H9 C: l) W0 j6 D2 k4 \取出冷冻管后， 须立即放入37 °C 水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时， 必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。- H9 d/ m# N+ `9 T+ o$ W
2 细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO？0 O% D9 s0 o  `1 U. z! i/ P2 `
除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞）， 在解冻之后， 应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中， 待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。9 o" L9 b# l4 c1 \5 S
3 可否使用与原先培养条件不同之培养基？' {/ z3 k( }1 q% U9 L  S
不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基， 若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基， 细胞大都无法立即适应， 造成细胞无法存活。
! W, @5 v( S6 Q. J  {3 B4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？. t% ]6 S- `3 ^& X5 J2 R
不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源， 所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清， 在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。0 u: f( W3 H9 I, O5 `
5 何谓FBS, FCS, CS, HS ?
& e3 D$ x* G: J" O  [FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思， 两者都是指胎牛血清， FCS 乃错误的使用字眼， 请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS (horseserum) 则是指马血清。( }2 e% w$ ~2 I& D9 [
6 培养细胞时应使用5 % 或10% CO2？或根本没有影响？( p) f; Y# j8 i9 e0 R" D
一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统， 而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时，细胞培养时应使用10 % CO2；当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时， 则应使用5 % CO2 培养细胞。
: d: j* C5 @! K+ |" G* T1 f8 P7 何时须更换培养基？
4 l9 o- p  @' `8 s4 \+ z1 b视细胞生长密度而定， 或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。
3 Z, L" ~2 W8 t. x& M7 |6 P8 培养基中是否须添加抗生素？5 w" K9 m  O! H7 Y4 u  J9 O( Q0 Q8 U
除于特殊筛选系统中外， 一般正常培养状态下， 培养基中不应添加任何抗生素。
) o6 ]7 E6 ?8 F/ x3 b- j, S9 附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA 浓度？应如何处理？" Z% v7 G9 P8 T9 K: O
一般使用之trypsin-EDTA 浓度为0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中， 保存于–20 °C，避免反复冷冻解冻造成trypsin 之活性降低， 并可减少污染之机会。