细胞培养问答

细胞卡也

1 冷冻管应如何解冻？
2 c- E' n' C  K2 |取出冷冻管后， 须立即放入37 °C 水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时， 必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。
1 p1 y8 ], s- I! B' k) F) S( }# U2 细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO？
7 Q; R5 W) w+ q! {/ V除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞）， 在解冻之后， 应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中， 待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。
* ~7 L: Y. \# W% e# I5 F, b) B$ ~' I5 ^3 可否使用与原先培养条件不同之培养基？
4 ?0 Y/ L' d- H6 c! p8 n不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基， 若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基， 细胞大都无法立即适应， 造成细胞无法存活。
/ g% @4 X3 \  A( q" O' o2 x+ B4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？
* f0 U' u7 T" a1 \) e, D; S% K不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源， 所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清， 在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。/ ?5 U$ f1 \  d" X8 l3 z
5 何谓FBS, FCS, CS, HS ?
9 R( d4 p) }, h) S4 u( rFBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思， 两者都是指胎牛血清， FCS 乃错误的使用字眼， 请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS (horseserum) 则是指马血清。
2 v, x, `5 v3 O) h7 p2 P6 培养细胞时应使用5 % 或10% CO2？或根本没有影响？
: }2 C$ d* p, W( b一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统， 而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时，细胞培养时应使用10 % CO2；当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时， 则应使用5 % CO2 培养细胞。
2 N; _" g2 W3 Y0 w# j0 B; O7 何时须更换培养基？, w3 f# J9 m* \2 I# u" V+ s/ A% w
视细胞生长密度而定， 或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。2 o0 R. v/ Q  k
8 培养基中是否须添加抗生素？
- V9 y- s- R9 }0 [) f( w 除于特殊筛选系统中外， 一般正常培养状态下， 培养基中不应添加任何抗生素。; j4 w; O( t9 p; K$ Y0 g
9 附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA 浓度？应如何处理？" z* x4 u# S" G& B9 k8 Z! D
一般使用之trypsin-EDTA 浓度为0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中， 保存于–20 °C，避免反复冷冻解冻造成trypsin 之活性降低， 并可减少污染之机会。