请问大家冻细胞的时候是用冻存盒冻的吗？

jiuxuya

另外大家是怎么冻的？直接放冻存盒里放零下80度冰箱里，还是先放4度再放零下80度再放液氮呢？有没有比较标准的冻存方法？

吃呆猫

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* U) R7 l: @3 K6 }1 E冻存盒（泡沫盒也可以）可以直接放-80，不用的话就是梯度降温4度半小时，-20度2小时，最后放-80，一天后转液氮。干细胞冻存死的多存活率不高，小心操作。

jiuxuya

回复 吃呆猫 的帖子9 n# R) U1 _9 B3 n

$ D( @  C& w- j4 v2 t: j/ C4 @好的，多谢，请问怎样冻存可以死的少些呢？

ltickp

脐带干细胞 放入程序降温盒后（coolcell）后放-80℃；免疫细胞加bambanker后直接放-80℃
' e" k" E; R& J. V. M4 r/ ^# i7 @没有设备的话就直接 4℃ 30min，-20℃ 2h，-80℃过夜，最后转液氮+ l1 Z/ |" K/ N

吃呆猫

回复 jiuxuya 的帖子0 l1 d7 u5 h9 h: p

4 c' [, @+ w- O$ S好的血清，冻存液9：1，你冻之前细胞的状态，复苏的时候快融，都很重要

jiuxuya

回复 吃呆猫 的帖子3 L. @. y$ J, w4 f+ B5 ~  f
5 ^8 ]2 s9 ~6 p2 G. X* H
请问如果血清我比如我用的是血清替代物已经和培养液进行融合了，那么含有血清的培养液和冻存液DMSO之间的比例是不是就是9:1？换句话说加9ml带血清的培养液再加1毫升DMSO即可？

jiuxuya

回复 ltickp 的帖子3 r- }( f' d: X( b
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您好既然您说买好的外部冻存液那我问下，一般免疫细胞您冻存是按照冻存液什么密度冻的？5*10的8还是最大1*10的9？另外脐带的冻存是自己配置还是也用免疫细胞的冻存液呢？

卓俊文

预冷冻存盒（含异丙醇）直接-80冻存，第二天即可转液氮。没冻存盒用10层纱布包裹放-80第二天转液氮也ok。

jiuxuya

回复 卓俊文 的帖子' R  q* I2 F' Z9 n. h9 x% D

7 V3 n$ \9 O7 x$ W1 \& X% h好的，谢谢，请问你们冻液氮的时候记录位置是怎么记录的？

吃呆猫

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回复 jiuxuya 的帖子% O. |5 ?1 s; u' F$ @% C% e
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纯血清（FBS）: DMSO=9:1