请问大家冻细胞的时候是用冻存盒冻的吗？

jiuxuya

另外大家是怎么冻的？直接放冻存盒里放零下80度冰箱里，还是先放4度再放零下80度再放液氮呢？有没有比较标准的冻存方法？

吃呆猫

5 g- \& g* n) }. l: G
2 r+ k: |& I, A) d5 A冻存盒（泡沫盒也可以）可以直接放-80，不用的话就是梯度降温4度半小时，-20度2小时，最后放-80，一天后转液氮。干细胞冻存死的多存活率不高，小心操作。

jiuxuya

回复 吃呆猫 的帖子1 b! L7 X+ F* }

. H) p- O  M3 e好的，多谢，请问怎样冻存可以死的少些呢？

ltickp

脐带干细胞 放入程序降温盒后（coolcell）后放-80℃；免疫细胞加bambanker后直接放-80℃
/ ]  c3 n5 \+ r8 F没有设备的话就直接 4℃ 30min，-20℃ 2h，-80℃过夜，最后转液氮
1 H/ H# x6 i9 W0 e' i

吃呆猫

回复 jiuxuya 的帖子( F2 ?5 Q' y9 `1 g$ h8 g0 v4 C

9 \/ E# Z5 _! d$ J# j9 _好的血清，冻存液9：1，你冻之前细胞的状态，复苏的时候快融，都很重要

jiuxuya

回复 吃呆猫 的帖子
% v5 t2 F3 L1 F: P: q1 r2 Y( t  x$ e7 T# b1 _
请问如果血清我比如我用的是血清替代物已经和培养液进行融合了，那么含有血清的培养液和冻存液DMSO之间的比例是不是就是9:1？换句话说加9ml带血清的培养液再加1毫升DMSO即可？

jiuxuya

回复 ltickp 的帖子. D; u! k4 J' v3 Z7 R

2 `3 D- c& U! C* g您好既然您说买好的外部冻存液那我问下，一般免疫细胞您冻存是按照冻存液什么密度冻的？5*10的8还是最大1*10的9？另外脐带的冻存是自己配置还是也用免疫细胞的冻存液呢？

卓俊文

预冷冻存盒（含异丙醇）直接-80冻存，第二天即可转液氮。没冻存盒用10层纱布包裹放-80第二天转液氮也ok。

jiuxuya

回复 卓俊文 的帖子4 C- G6 L$ `1 u. J5 N6 }

) B6 z3 K0 i+ u5 d/ u好的，谢谢，请问你们冻液氮的时候记录位置是怎么记录的？

吃呆猫

$ v4 I% u1 F9 }, N; t1 o1 N
8 k) W0 ]5 d6 N: [1 z: o回复 jiuxuya 的帖子
* Z5 ^0 o4 d, w) d/ o4 l" a  ]1 m* A2 k! _2 [
纯血清（FBS）: DMSO=9:1