求助Invitrogen（Gibco）胶原酶 U与mg之间的换算关系

diablohtj

在消化提取UC-MSC过程中，需要用到 collagenase I型，国内文献一般报到采用0.1%的工作浓度，而国外文献看到用300U/ml。
; h4 _3 q+ X6 d7 O& M' R% {请问如何配置300U/ml的胶原酶，或者1mg相当于多少U？ （厂家的说明书上称常用的浓度为0.1%~0.5%或者50U/ml~100U/ml）。

yierlee

搞半天还以为自己在丁香园，崩溃

diablohtj

谢谢，弄懂了含义，测定还是比较麻烦的，还是自己摸条件比较划算啊！

大嘴鳄鱼

Sigma有比较详细的测定方式。呵呵，顺便给你附上。. o- s  b2 q& v5 K7 v" E7 ^2 |. w8 h
+ N: k2 q- I: q! c  Q$ t5 u" p9 t9 ]$ p
不过咱们要是想要向IU靠拢，代价还是比较大的，还需要购买反应底物，估计老板不一样答应让你买这个看似不重要的东西。。。。。。。: h* ~' K! p0 Z) v. k. S
' E+ y. {4 }8 {# O

大嘴鳄鱼

U 好像得通过测酶活来确定吧， 胶原酶生物制剂，和化学制剂不一样，U应该每一批都是不同的。很难和质量划上 ...
6 t; x2 P, x5 T5 f" k) C; Ttelomerase 发表于 2009-12-15 14:34

" R) n6 J3 \1 v$ s3 A: p2 _
" x8 V# k2 [* Y" c为了楼主的问题，我特意还查了一下，U确实是每批不同。而且还顺带附上除了胶原酶之外的其他酶单位测定的方法。希望对楼主有提示。
8 p. |9 e6 ]' m  B) u% w+ p/ O
2 `/ [* r* \% i1 a: U! [Unit Definition/ f2 u3 Y( f" W8 N4 v2 Q, x

! A2 u) {* R  }' i" a! F: w5 oOne collagen digestion unit liberates peptides from collagen equivalent in ninhydrin color to 1.0 μmole of leucine in 5 hr at pH 7.4 at 37 °C in the presence of calcium ions.
1 e' m1 p5 v+ _) A1 o+ S7 Y
5 ^! ~$ A' k# COne FALGPA hydrolysis unit hydrolyzes 1.0 μmole of furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala per min at pH 7.5 at 25 °C in the presence of calcium ions.  O5 {' u% y0 E4 g7 s  Q
6 V- l8 p: B2 t, u0 J; L; D
One neutral protease unit hydrolyzes casein to produce color equivalent to 1.0 μmole tyrosine per 5 hr at pH 7.5 at 37 °C.
% m0 e; V4 `* q. U' U* s6 D
$ Y0 Z0 i9 q+ b, T% h* NOne clostripain unit hydrolyzes 1.0 μmole of BAEE per min at pH 7.6 at 25 °C in the presence of DTT.

diablohtj

楼主自己换算就大约知道了呀。" Y  Q- x+ r: c9 h9 j2 l
厂家的说明书上称常用的浓度为0.1%~0.5%或者50U/ml~100U/ml
: K6 s% V' V& _  s0 a, F
1 S1 P7 U: R+ \1 K- d3 Y0.1%=0.1 g/ ...
* P; M3 R7 D6 K( Q1 E6 P大嘴鳄鱼 发表于 2009-12-15 14:31

$ V5 [0 [. D, i5 ]  l, @
0 Y) a6 c8 \1 V* @6 J3 _: ~
0.1%~0.5%或者50U/ml~100U/ml
, o  n6 s" ]9 ]% ^' y4 N6 |并不能说明0.1%就对应50U/ml啊，而且找你的算法最后是1mg=50~100U不是1ug。
4 @, ]: v7 @. f7 u0 ~9 m. Y3 q. o! M, X; S, e# C" x8 ]
4 H. H% H( r* k
如果按版主的意思，需要测定活性单位的话，300U/L如何配置和验证呢？

telomerase

U 好像得通过测酶活来确定吧， 胶原酶生物制剂，和化学制剂不一样，U应该每一批都是不同的。很难和质量划上等号的吧！

大嘴鳄鱼

因为胶原酶都是从动物身上提取的，所以在国际单位上不是特别的准，也就是一个近似值。而且，每一批次产品，都有细小的差别。

大嘴鳄鱼

楼主自己换算就大约知道了呀。6 m2 V; L6 t9 y! X% M3 s# |
厂家的说明书上称常用的浓度为0.1%~0.5%或者50U/ml~100U/ml
2 C) J, {, D" o0 e7 ]3 S" l) D& X) G, ?
0.1%=0.1 g/100 ml=100 ug/100 ml=1 ug/ml。也就是1 ug大约是50-100 U。

diablohtj

呵呵 没人回答啊，在网上好像没搜到相关资料！