求助Invitrogen（Gibco）胶原酶 U与mg之间的换算关系

diablohtj

在消化提取UC-MSC过程中，需要用到 collagenase I型，国内文献一般报到采用0.1%的工作浓度，而国外文献看到用300U/ml。! b. k; K1 L3 I5 G5 A: q
请问如何配置300U/ml的胶原酶，或者1mg相当于多少U？ （厂家的说明书上称常用的浓度为0.1%~0.5%或者50U/ml~100U/ml）。

diablohtj

呵呵 没人回答啊，在网上好像没搜到相关资料！

大嘴鳄鱼

楼主自己换算就大约知道了呀。
9 ~' w  \- x5 H- U$ ]厂家的说明书上称常用的浓度为0.1%~0.5%或者50U/ml~100U/ml) P9 V4 M% v3 ^! x( `

& I8 n4 L6 f1 v8 n9 M, J0.1%=0.1 g/100 ml=100 ug/100 ml=1 ug/ml。也就是1 ug大约是50-100 U。

大嘴鳄鱼

因为胶原酶都是从动物身上提取的，所以在国际单位上不是特别的准，也就是一个近似值。而且，每一批次产品，都有细小的差别。

telomerase

U 好像得通过测酶活来确定吧， 胶原酶生物制剂，和化学制剂不一样，U应该每一批都是不同的。很难和质量划上等号的吧！

diablohtj

楼主自己换算就大约知道了呀。2 o1 A& }) S' C* `+ T
厂家的说明书上称常用的浓度为0.1%~0.5%或者50U/ml~100U/ml5 s% N" O( l7 @* H8 l: X# q

, F  K- Q2 g/ G( P0.1%=0.1 g/ ...8 R4 k( d' U* C! a8 ]) D. Y
大嘴鳄鱼 发表于 2009-12-15 14:31

4 T/ D" `& V. l8 Q+ m% Z( t
6 T4 C% O* O) S6 s# ^7 w0.1%~0.5%或者50U/ml~100U/ml+ ~8 Y' I8 }( u, _& ~1 R3 ?
并不能说明0.1%就对应50U/ml啊，而且找你的算法最后是1mg=50~100U不是1ug。
* Q% q( x5 C3 ?- t3 v, |* @- t& I) E" H* P  a" }
: q' l& g" ?* u5 X5 D
如果按版主的意思，需要测定活性单位的话，300U/L如何配置和验证呢？

大嘴鳄鱼

U 好像得通过测酶活来确定吧， 胶原酶生物制剂，和化学制剂不一样，U应该每一批都是不同的。很难和质量划上 ...
  R) Z  i9 |9 Z/ W! f: |7 a# ktelomerase 发表于 2009-12-15 14:34

7 Q2 m! E7 x9 H  f+ b$ N$ s8 H4 ~, K4 o! D- w
为了楼主的问题，我特意还查了一下，U确实是每批不同。而且还顺带附上除了胶原酶之外的其他酶单位测定的方法。希望对楼主有提示。
! U( ^$ J4 u$ s& o  y; V& Z. t" W; g  Z& D
Unit Definition  N- l* t& Y. L' L/ o, `0 q/ ]

( E6 t: H: r$ Z7 u6 N% pOne collagen digestion unit liberates peptides from collagen equivalent in ninhydrin color to 1.0 μmole of leucine in 5 hr at pH 7.4 at 37 °C in the presence of calcium ions.. G* I* l8 p' Q4 `
9 u* ~3 w  o& q& M% d4 B3 P1 `
One FALGPA hydrolysis unit hydrolyzes 1.0 μmole of furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala per min at pH 7.5 at 25 °C in the presence of calcium ions.  }: V; S6 M) d, @, W7 u1 N% O4 n
8 D  Q: {+ o' l  V( K1 ^
One neutral protease unit hydrolyzes casein to produce color equivalent to 1.0 μmole tyrosine per 5 hr at pH 7.5 at 37 °C.! X+ {6 A5 s7 x6 U( C# f( o" j! P

  {3 {% s" l( B2 @6 DOne clostripain unit hydrolyzes 1.0 μmole of BAEE per min at pH 7.6 at 25 °C in the presence of DTT.

大嘴鳄鱼

Sigma有比较详细的测定方式。呵呵，顺便给你附上。
+ ^; F# s" B0 J8 h6 [& v# ^- c6 }7 h# V$ Q! t
不过咱们要是想要向IU靠拢，代价还是比较大的，还需要购买反应底物，估计老板不一样答应让你买这个看似不重要的东西。。。。。。。
9 n: N2 V* `1 G& P
! Q8 z9 e. \0 `# h$ b' A( J* B

diablohtj

谢谢，弄懂了含义，测定还是比较麻烦的，还是自己摸条件比较划算啊！

yierlee

搞半天还以为自己在丁香园，崩溃