求流式细胞 cd34 cd90 操作

yuheng

分为一步法还二步法，不清楚你的抗体选择什么的？

yuheng

这里有一般步骤，可以参考下：
1 u" R$ ~. Y9 Y) p; I* a' K. q. }制备活性高的细胞悬液(培养细胞系、外周血单个核细胞、
1 D0 i3 e2 Z: W　　　　　胸腺细胞、脾细胞等均可用于本法)+ l+ n  a& y- @3 I. q2 f( Y
　　　　　　　　　　　　　　　　　↓3 T+ T- t8 N( G8 l& l: r8 e9 r
　　　　　　　　　用10％FCS　RPMI1640调整细胞浓度为
, N2 X4 \0 H  {' Z- \　　　　　　　　　5×106～１×107／ml
7 h* t5 O2 T) ^, D0 A0 R" g　　　　　　　　　　　　　　　　　↓
/ T% w+ J' b( j' v3 h& Q　　　　　　　　取40μl细胞悬液加入预先有特异性McAb(5～50μl)# C5 y1 u+ z: Z& C! t+ y# z- U
　　　　　　　　的小玻璃管或塑料离心管，再加50μl 1∶20(用DPBS
  @  S+ i( D+ q, B! b0 u& t. Q" @　　　　　　　　稀释)灭活正常兔血清
' |) @' R. s$ X. W& \　　　　　　　　　　　　　　　　　↓4℃ 30min5 i4 w! F0 F, I# r+ L8 t' S/ S
　　　　　　　　用洗涤液洗涤2次，每次加洗涤液2ml左右5 p) C+ D4 Z0 Y; c
　　　　　　　　　　　　　　1000rpm×5min
' h. S0 C. \: {9 r2 T　　　　　　　　　　　　　　　　　↓: F. T, l$ ]" z: N9 d+ p
　　　　　　　　　弃上清，加入50μl工作浓度的羊抗鼠
3 e; K4 j) Y8 x) Q( k　　　　　　　　　(或兔抗鼠)荧光标记物，充分振摇
3 Y0 n3 t$ ?, Z/ S　　　　　　　　　　　　　　　　　↓　4℃ 30min( {/ Y! Y* I4 H5 X4 M
　　　　　　　　　用洗涤液洗涤2次，每次加液2ml左右
" e. m, I- Z: P: a　　　　　　　　　　　　　　1000rpm×5min% r* h. g, ?# }7 W8 t
　　　　　　　　　　　　　　　　　↓  A; E! j' L* S" d+ |
　　　　　　　　　加适量固定液(如为FCM制备标本，一般加入$ N0 w6 A# S# ~5 y
　　　　　　　　　1ml固定液，如制片后在荧光显微镜下观察，9 f9 l4 U; I/ U: f1 \9 Y
　　　　　　　　　视细胞浓度加入100～500μl固定液). n4 T! A( Q# U- K$ y( c
　　　　　　　　　　　　　　　　　↓
- I5 Z7 m* `, Y5 a# X6 C  [3 L　　　　　　　　　FCM检测或制片后荧光显微镜下观察/ u, l% [; p- Y5 Y5 a7 m( T6 k* [
　　　　　　　　　　(标本在试管中可保存5～7天)