求流式细胞 cd34 cd90 操作

slong

步骤要详细 我是第一次做 希望高手 解答

cartoonyang

为何没有回答？我也需要知道，因为我马上要开始做干细胞表面抗原的检测，用FACS。

kqyy

2个标记够吗

yuheng

分为一步法还二步法，不清楚你的抗体选择什么的？

yuheng

这里有一般步骤，可以参考下：, ]& K) ?/ o0 U7 F3 b+ O
制备活性高的细胞悬液(培养细胞系、外周血单个核细胞、
! x" m# {# X7 T! }7 ]3 E: s1 l　　　　　胸腺细胞、脾细胞等均可用于本法)
0 }5 N$ ^8 I7 b　　　　　　　　　　　　　　　　　↓
  U8 a  ^& i8 ]4 z. H# b; a　　　　　　　　　用10％FCS　RPMI1640调整细胞浓度为
2 U1 m. T5 ?) x　　　　　　　　　5×106～１×107／ml. C5 p$ m9 w# O% Q
　　　　　　　　　　　　　　　　　↓
  o9 |: i* T6 m4 T( K! i1 d　　　　　　　　取40μl细胞悬液加入预先有特异性McAb(5～50μl)! D  q6 h5 @' Z( _2 B6 o, p' S; Y9 }
　　　　　　　　的小玻璃管或塑料离心管，再加50μl 1∶20(用DPBS+ M4 F- I" U+ {) e  T
　　　　　　　　稀释)灭活正常兔血清
. U8 m& {( Y1 ^, p　　　　　　　　　　　　　　　　　↓4℃ 30min3 K. ~. {* G; W0 i2 O: V; Z8 b" p: `
　　　　　　　　用洗涤液洗涤2次，每次加洗涤液2ml左右  L* d" E  |- S$ R0 L9 p
　　　　　　　　　　　　　　1000rpm×5min
+ Y( {4 d4 v5 G$ J- k# g2 o% ~/ J　　　　　　　　　　　　　　　　　↓: }8 `4 \) s7 B& X3 g/ M4 s
　　　　　　　　　弃上清，加入50μl工作浓度的羊抗鼠
9 T/ V; N, b  O　　　　　　　　　(或兔抗鼠)荧光标记物，充分振摇
# h+ \# B; I. f0 W' o  x　　　　　　　　　　　　　　　　　↓　4℃ 30min% o1 f2 T+ u5 h1 I
　　　　　　　　　用洗涤液洗涤2次，每次加液2ml左右
2 h" |3 _4 f7 ~" N　　　　　　　　　　　　　　1000rpm×5min
8 d$ j& d2 b4 i& P　　　　　　　　　　　　　　　　　↓4 a! X2 h' {) g! v& Z% |& K0 J0 \2 S- R
　　　　　　　　　加适量固定液(如为FCM制备标本，一般加入
* \/ a5 v; m7 F8 x- }. f　　　　　　　　　1ml固定液，如制片后在荧光显微镜下观察，
  r) x( u, v+ Y+ b/ H0 N  O　　　　　　　　　视细胞浓度加入100～500μl固定液)3 n0 O0 {  J9 I  c3 m! K
　　　　　　　　　　　　　　　　　↓/ s/ h6 S8 Y$ X9 H/ o7 w+ S- B3 q; g
　　　　　　　　　FCM检测或制片后荧光显微镜下观察
7 p# W6 p. l* l3 @6 W2 J　　　　　　　　　　(标本在试管中可保存5～7天)

slong

谢谢

mag2722

谢谢

helenkim

学习了，谢谢分享!

nhzxcsc

我来分享一下我的步骤吧：
  G0 K' a' o& q0 Y1、        细胞消化。
6 A, \; g( ^5 S' o& s& N2、        PBS洗涤2次后，重悬于含有1%FBS和0.1%叠氮钠的PBS中，制备成5×105/100UL细胞悬液。( b9 H: {( W( {* i0 B$ u
3、        依次添加**抗体，避光4℃孵育30-45分钟。
, t5 ]6 V% b* ]( H  K4、        1500rpm离心5min去除抗体，添加PBS洗涤2次‘
( S( ?1 ?9 N% f( |- ?5、        添加适量PBS重悬后上机，对于每个样本至少计数1×104，数据采用FlowJo软件分析。

brian111

都半年了，还没沉啊。。。结果怎么样？分享一下吧~