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ips细胞产生问题?   [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2010-1-26 21:41 |只看该作者 |正序浏览 |打印
请教各位专家一个问题,在将四种转录因子导入成熟细胞时,是用在一个载体上连接四种因子的基因片段,还是一个因子一个载体,+ P; c$ X2 c( L3 I
如果是前者,插入的片段会不会超过有些载体的负荷,1 P' U  u% c) N* w5 G
如果是后者,如本人用慢病毒载体,会不会各个因子载体在整合进宿主细胞时,发生竞争抑制呢?& H) e1 I1 n- S! Y3 A2 f
谢谢!
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金话筒 优秀会员 美女研究员 新闻小组成员

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发表于 2010-3-5 12:57 |只看该作者
单独转和一起转都有人做过,单独转因为要四个基因一起转进去所以效率很低,然后就有人想到放在一个载体上了
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发表于 2010-2-15 18:53 |只看该作者
回复 1# ahfjwangrui & ?( M' e: i0 K* r
, t/ O# _- g9 _5 [7 n
现在可以买到已连好的病毒质粒 addgene
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金话筒 优秀版主

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发表于 2010-2-3 21:40 |只看该作者
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应该是根据片段大小选择是否选择一个或多个载体
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发表于 2010-2-2 21:19 |只看该作者
有没有文章比较过单独转和整体转的差异啊?谢谢~~
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发表于 2010-1-30 01:51 |只看该作者
楼上讲得很有道理,,
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发表于 2010-1-29 09:37 |只看该作者
问题是这四个因子进入细胞后,翻译出来的蛋白量难以估计,也就存在四个因子之间的平衡问题;
/ s% u1 d% E( M" @, P# A, s3 L分开包装的话,可以控制相应的病毒量,使得四个因子的病毒量有个大致的平衡。
( W$ r6 v4 V9 y我觉得,这四个因子之间肯定存在一个平衡态,达到平衡台的话,就会启动细胞从普通细胞向胚胎干细胞的质的转变。否则,就难以启动,或者说,即使启动了也不能完全。
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发表于 2010-1-27 08:43 |只看该作者
四个因子肯定是很大,6K左右吧,组合到一个载体上肯定会影响那个表达效率!单独四个因子分别转,存在随机问题,如果不是创新,建议用传统办法
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地板
发表于 2010-1-26 22:16 |只看该作者
有些是四个载体分别一个因子。不过也有人是把三个因子连到一个载体上,然后还有一个因子是一个载体。如果是四个因子一个载体,要关注其大小问题。
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优秀版主 金话筒 美女研究员 新闻小组成员

报纸
发表于 2010-1-26 22:11 |只看该作者
至于楼主提到的"超过有些载体的负荷""发生竞争抑制"还没有在文献中看到,因为这些方法都是有实验室做过了,而且在再程序化过程中都证明是可行的,所以可能不存在你担心的问题吧,一家之言~希望大家广泛讨论啊
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