ips细胞产生问题？

ahfjwangrui

请教各位专家一个问题，在将四种转录因子导入成熟细胞时，是用在一个载体上连接四种因子的基因片段，还是一个因子一个载体，
9 r6 C& L# m" q' @4 d" n) |如果是前者，插入的片段会不会超过有些载体的负荷，
# x5 Q/ F6 p2 T- d如果是后者，如本人用慢病毒载体，会不会各个因子载体在整合进宿主细胞时，发生竞争抑制呢？) `. m3 l3 _0 o* o) w! T9 m
谢谢！

不倒翁

单独转和一起转都有人做过，单独转因为要四个基因一起转进去所以效率很低，然后就有人想到放在一个载体上了

jimzhua

回复 1# ahfjwangrui
  O9 k" K8 r7 v5 `0 b6 N& S' K8 T! K+ u% [% t* @7 X6 ?" K! Q
现在可以买到已连好的病毒质粒 addgene

baichunyu

应该是根据片段大小选择是否选择一个或多个载体

tieyun

有没有文章比较过单独转和整体转的差异啊？谢谢~~

decloud2009

楼上讲得很有道理，，

feifa1314

问题是这四个因子进入细胞后，翻译出来的蛋白量难以估计，也就存在四个因子之间的平衡问题；
9 n$ u: Q' N8 m  g3 |; N  m5 J! o分开包装的话，可以控制相应的病毒量，使得四个因子的病毒量有个大致的平衡。
4 z+ A( P. ~, m& k) Z) C我觉得，这四个因子之间肯定存在一个平衡态，达到平衡台的话，就会启动细胞从普通细胞向胚胎干细胞的质的转变。否则，就难以启动，或者说，即使启动了也不能完全。

lingren

四个因子肯定是很大，6K左右吧，组合到一个载体上肯定会影响那个表达效率！单独四个因子分别转，存在随机问题，如果不是创新，建议用传统办法

双刀

有些是四个载体分别一个因子。不过也有人是把三个因子连到一个载体上，然后还有一个因子是一个载体。如果是四个因子一个载体，要关注其大小问题。

treestem

至于楼主提到的"超过有些载体的负荷""发生竞争抑制"还没有在文献中看到，因为这些方法都是有实验室做过了，而且在再程序化过程中都证明是可行的，所以可能不存在你担心的问题吧，一家之言~希望大家广泛讨论啊