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楼主: 胡鹏飞
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请问体转干的四个转录因子在细胞质中存在吗?   [复制链接]

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楼主
发表于 2010-1-30 10:39 |显示全部帖子
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回复 6# 胡鹏飞
( ]  n: x* R9 k9 U& z0 J
( K2 r! ]( \+ f4 k0 h2 O) a6 F) q
: @: K  d# O3 u    你是怎么导入的?转录因子入核才能发挥作用,丁盛有做过这种工作,蛋白诱导IPS
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沙发
发表于 2010-1-30 12:11 |显示全部帖子
回复 8# msliyv : ?/ `# P8 }/ A0 w* m- x

  s# Q) C4 |' ]1 ]- ^, b, i' q$ h1 v9 r. _/ c
     他用的是polyR融合蛋白,另外还可以用TAT融合,都可以进入细胞核。0 B/ Y/ ?0 H8 w8 v, f5 U$ m( z
至于有机制导向到核内,我觉得在细胞外合成的蛋白导入细胞后并不一定可以起作用。以为细胞定位是在合成的过程中就决定了的,也许还涉及一些定位序列,而不是在合成成熟的蛋白之后才决定。
; N1 @9 N' G* f2 c至于活性,这个问题不太好检测,我也不知道有哪些方法检测蛋白活性,貌似都是从功能上检测的,但这些因子不知道怎么检测,只能是认为可溶状态就是有活性的了。欢迎高人指点。你要有钱的话可以试试做晶体,哈哈
# h* ]/ [) X, t) P% k4 v9 M0 n导入蛋白的方法,你可以参见下面这篇文章
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藤椅
发表于 2010-1-30 14:58 |显示全部帖子
时间太短?照片呢,传上来看看啊
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板凳
发表于 2010-1-31 15:15 |显示全部帖子
回复 15# 胡鹏飞 % z$ r5 s* I/ F! I# [
- y" G+ l' @/ ?/ W+ ]! R- j2 p

5 s: ]- j) T: c; a/ ~2 D    我觉得尽量避免包涵体表达然后复性,本来活性就没法检测,复性后就更不好说了,加长孵化时间看看
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报纸
发表于 2010-2-4 20:51 |显示全部帖子
回复 25# 胡鹏飞
6 @* [4 g2 [! l, I* h7 B$ L
" ~4 X. m+ @2 ^1 h' G* V. @
) [$ G' U3 ]3 P& W2 |    蛋白诱导IPS么?试试吧,反正IPS诱导是要等的,我不觉得是这个问题,以前有人做的GFP好像可以入核的,
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