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楼主: 胡鹏飞
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请问体转干的四个转录因子在细胞质中存在吗?   [复制链接]

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楼主
发表于 2010-1-30 10:39 |显示全部帖子
回复 6# 胡鹏飞
# t9 \: e( i1 T: `+ s
" f3 ~# v  R% a
! |$ W2 m- C% R! S( Q1 @4 m- D    你是怎么导入的?转录因子入核才能发挥作用,丁盛有做过这种工作,蛋白诱导IPS
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沙发
发表于 2010-1-30 12:11 |显示全部帖子
回复 8# msliyv
6 H, q6 q2 a6 Z( D; i; a- F: C5 d9 o+ f, b; ]. H

9 h( c" k& V( E& T. [. J& E     他用的是polyR融合蛋白,另外还可以用TAT融合,都可以进入细胞核。% v6 g; Y- i5 P0 Z/ e& K
至于有机制导向到核内,我觉得在细胞外合成的蛋白导入细胞后并不一定可以起作用。以为细胞定位是在合成的过程中就决定了的,也许还涉及一些定位序列,而不是在合成成熟的蛋白之后才决定。
1 Q. Y! N/ T5 u( o9 }% h) @至于活性,这个问题不太好检测,我也不知道有哪些方法检测蛋白活性,貌似都是从功能上检测的,但这些因子不知道怎么检测,只能是认为可溶状态就是有活性的了。欢迎高人指点。你要有钱的话可以试试做晶体,哈哈
# i* \; h. o7 }导入蛋白的方法,你可以参见下面这篇文章
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藤椅
发表于 2010-1-30 14:58 |显示全部帖子
时间太短?照片呢,传上来看看啊
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板凳
发表于 2010-1-31 15:15 |显示全部帖子
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回复 15# 胡鹏飞
+ [$ ^$ Q6 ?$ j5 B$ M6 \4 M" a% |9 O, }4 x8 R) Q8 C' u- ~$ _

- I( Z9 |3 @" i$ }    我觉得尽量避免包涵体表达然后复性,本来活性就没法检测,复性后就更不好说了,加长孵化时间看看
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报纸
发表于 2010-2-4 20:51 |显示全部帖子
回复 25# 胡鹏飞 1 W4 Z: Y( \' |9 |: J
/ H7 d8 M! j' h( e; ^4 y6 o. r! s

7 Y1 |! ^3 |" f5 u9 m    蛋白诱导IPS么?试试吧,反正IPS诱导是要等的,我不觉得是这个问题,以前有人做的GFP好像可以入核的,
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