请问体转干的四个转录因子在细胞质中存在吗？

胡鹏飞

请问这四个因子的蛋白在胚胎干细胞的细胞质和细胞核中都存在吗？他们在细胞质和细胞核中是怎么转运的呢？谢谢

anminleiryan

我想，细胞质内是应该存在其前体的；因为蛋白质的翻译必须在细胞质内通过核糖体进行，经过加工后，这些转录因子重新返回细胞核内发挥功能

anminleiryan

回复 2# anminleiryan + Y& T: R) B  q! E* M# m

0 o) N9 r! [+ W) U至于他们在细胞质和细胞核中是怎么转运的，你只能通过自己有目的的查资料寻求答案了

军医

学习了

qizhi502

尽然命名为转录因子就是在核中存在了。蛋白合成是在胞质中的

胡鹏飞

谢谢大家！还想问一下，我将原核表达的这四个因子的可溶蛋白导入到细胞质中，核膜附近，可以发挥生物学功能吗？

ghfvcat

回复 6# 胡鹏飞
' x& `6 U5 Q: ^( Y+ b& @, u  L% _8 i  u# a# t" b7 J7 S
; _* u( i; t9 y' f+ v
    你是怎么导入的？转录因子入核才能发挥作用，丁盛有做过这种工作，蛋白诱导IPS

msliyv

这文章里好像没有提到用什么方法将蛋白导入细胞的。
' d5 H+ Q; B1 j0 c+ H
' d7 V$ X& c' Y5 H% V至于转录因子进核的问题，我倒不觉得是个问题。因为内源的Oct3/4, Sox2, Klf4, c-Myc表达时也是在细胞质中表达然后通过细胞自己的机制导向到核内。所以只要以合适的方法将四种因子的蛋白导入细胞质，有很大的可能这些蛋白会被运送到细胞核。
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另一个问题是你用原核表达的蛋白有活性吗？你如何鉴定他们的活性？( V0 t9 k5 U+ Z. d% r5 R! [4 W0 K

2 V+ Y& h; Z* T/ w1 x回复 7# ghfvcat

ghfvcat

回复 8# msliyv 4 ?' Q" X* X  A$ \& g. w
8 _/ l7 P3 U, J" ]* }( e, j% d

6 M: i0 t, [/ s' h/ [4 I1 K- w3 H     他用的是polyR融合蛋白，另外还可以用TAT融合，都可以进入细胞核。
, Y, Y6 Y2 T3 N/ \! y( l至于有机制导向到核内，我觉得在细胞外合成的蛋白导入细胞后并不一定可以起作用。以为细胞定位是在合成的过程中就决定了的，也许还涉及一些定位序列，而不是在合成成熟的蛋白之后才决定。, ]- w8 F1 j4 a" M
至于活性，这个问题不太好检测，我也不知道有哪些方法检测蛋白活性，貌似都是从功能上检测的，但这些因子不知道怎么检测，只能是认为可溶状态就是有活性的了。欢迎高人指点。你要有钱的话可以试试做晶体，哈哈
; p4 q+ T  ~$ R导入蛋白的方法，你可以参见下面这篇文章

胡鹏飞

我先导入的TAT-EGFP融合蛋白，但是细胞核里面没有，都在核膜周围聚集，这是什么原因呢？