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请问体转干的四个转录因子在细胞质中存在吗?   [复制链接]

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楼主
发表于 2010-1-30 10:39 |显示全部帖子
回复 6# 胡鹏飞
. v6 M9 t' N' Z' n& w3 B
9 w  L/ }8 X  m# u/ }
$ E* N% |1 F/ r8 \" \- y6 s& O2 p    你是怎么导入的?转录因子入核才能发挥作用,丁盛有做过这种工作,蛋白诱导IPS
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沙发
发表于 2010-1-30 12:11 |显示全部帖子
回复 8# msliyv
- i. \& l$ `# k2 x+ x# q0 D: j: a' W5 Z

5 v/ r- _' }8 B0 s     他用的是polyR融合蛋白,另外还可以用TAT融合,都可以进入细胞核。8 Q' x2 T& p6 U6 r
至于有机制导向到核内,我觉得在细胞外合成的蛋白导入细胞后并不一定可以起作用。以为细胞定位是在合成的过程中就决定了的,也许还涉及一些定位序列,而不是在合成成熟的蛋白之后才决定。
: \, E  Y, o2 O! w6 i, E9 j& x至于活性,这个问题不太好检测,我也不知道有哪些方法检测蛋白活性,貌似都是从功能上检测的,但这些因子不知道怎么检测,只能是认为可溶状态就是有活性的了。欢迎高人指点。你要有钱的话可以试试做晶体,哈哈
( i& E6 Z7 r# y) ?* o7 F6 I导入蛋白的方法,你可以参见下面这篇文章
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藤椅
发表于 2010-1-30 14:58 |显示全部帖子
时间太短?照片呢,传上来看看啊
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板凳
发表于 2010-1-31 15:15 |显示全部帖子
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回复 15# 胡鹏飞
. {8 j! j! }( d8 g6 _
' n& M% Y* i5 j5 C
; M5 O) t9 A2 h4 d! H( s& X    我觉得尽量避免包涵体表达然后复性,本来活性就没法检测,复性后就更不好说了,加长孵化时间看看
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报纸
发表于 2010-2-4 20:51 |显示全部帖子
回复 25# 胡鹏飞
, H/ o$ X# M; T
$ u' A, C  v) }; e9 d2 M4 d+ D. o1 T( v1 Z' v: c: O
    蛋白诱导IPS么?试试吧,反正IPS诱导是要等的,我不觉得是这个问题,以前有人做的GFP好像可以入核的,
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