请问体转干的四个转录因子在细胞质中存在吗？

msliyv

回复 14# 胡鹏飞 5 m& y, Z# Q9 ^- z& a' }5 k
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我已经了解你表达的蛋白全部到了核膜附件，但是核膜附件的细胞器很多。我的意思是你可以加一些细胞器的染料，比如你表达的蛋白如果是GFP，那你可以用红色荧光的细胞器染料，这样你就可以通过confocal知道你导入的蛋白到底是在什么细胞器中。这对你了解问题所在很重要。已其猜测结果还不如进行这样一个简单的实验看看。9 I# I6 F- g5 {# P+ L' ^
3 v! ^/ O* g: y0 z3 f
如果你发现蛋白在lysosome中，那当然是降解了，如果是在ER等内膜系统，那非常有可能你的tag没有暴露出来或者设计有问题。
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希望对你有 帮助。有结果也希望告诉大家，这样大家可以一起学习。

胡鹏飞

谢谢您的指点

胡鹏飞

我用的细胞是反复冻存复苏的细胞，冷冻对核膜有什么影响呢？

msliyv

回复 23# 胡鹏飞 * ^9 O% P2 I" I& k# W! I# ~

0 R2 g& D6 r0 e3 @, n4 b* |/ F1 R没有，不应该

胡鹏飞

我想了想 虽然我做的穿膜肽-EGFP融合蛋白只能导入核周围进不去 可能是体外原核表达的蛋白空间结构的问题 穿膜肽的核定位序列没完全暴露出来 但是我想这四个因子应该都有自己的核定位序列 它既然进入了细胞质 也有可能靠自身的核定位序列自己进入核中发挥作用  因为快毕业了 我想按原方法往下做 大家觉得我的想法可行吗？希望大家多给点意见，谢谢

ghfvcat

回复 25# 胡鹏飞
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    蛋白诱导IPS么？试试吧，反正IPS诱导是要等的，我不觉得是这个问题，以前有人做的GFP好像可以入核的，