请问体转干的四个转录因子在细胞质中存在吗？

胡鹏飞

请问这四个因子的蛋白在胚胎干细胞的细胞质和细胞核中都存在吗？他们在细胞质和细胞核中是怎么转运的呢？谢谢

ghfvcat

回复 25# 胡鹏飞
* @8 Z$ r, Y$ i
* i1 y! U# |  A
6 w+ H- V' D  w5 Z# W$ N    蛋白诱导IPS么？试试吧，反正IPS诱导是要等的，我不觉得是这个问题，以前有人做的GFP好像可以入核的，

胡鹏飞

我想了想 虽然我做的穿膜肽-EGFP融合蛋白只能导入核周围进不去 可能是体外原核表达的蛋白空间结构的问题 穿膜肽的核定位序列没完全暴露出来 但是我想这四个因子应该都有自己的核定位序列 它既然进入了细胞质 也有可能靠自身的核定位序列自己进入核中发挥作用  因为快毕业了 我想按原方法往下做 大家觉得我的想法可行吗？希望大家多给点意见，谢谢

msliyv

回复 23# 胡鹏飞
! w6 k6 t6 |$ _4 \) W' A- `* A3 a4 f$ M: @& j! i' m8 z
没有，不应该

胡鹏飞

我用的细胞是反复冻存复苏的细胞，冷冻对核膜有什么影响呢？

胡鹏飞

谢谢您的指点

msliyv

回复 14# 胡鹏飞 * s5 ]( S8 Q. W( d: w2 \

, O# d* V9 V) P- }/ v我已经了解你表达的蛋白全部到了核膜附件，但是核膜附件的细胞器很多。我的意思是你可以加一些细胞器的染料，比如你表达的蛋白如果是GFP，那你可以用红色荧光的细胞器染料，这样你就可以通过confocal知道你导入的蛋白到底是在什么细胞器中。这对你了解问题所在很重要。已其猜测结果还不如进行这样一个简单的实验看看。0 z0 P- G$ G6 g6 }% C1 |/ k! E
& l/ i# k$ A; }( ]* D
如果你发现蛋白在lysosome中，那当然是降解了，如果是在ER等内膜系统，那非常有可能你的tag没有暴露出来或者设计有问题。
, n6 r" f2 L# G) k) ^, @/ t# ~% R7 ^
希望对你有 帮助。有结果也希望告诉大家，这样大家可以一起学习。

zlightmiss

回复 10# 胡鹏飞
: m1 p5 y! {4 o8 w% x7 o; S
8 d. G' o# p0 f' C% R/ v* }+ k7 V: y1 o& x- J
    可能表达出来的蛋白的三维结构不正确吧....

胡鹏飞

孵育了12小时仍然进不到细胞核

ghfvcat

回复 15# 胡鹏飞
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5 t3 v! P: \, c0 f' z$ M1 e* ~8 X% V# d/ j2 ]3 y' W* |8 Y
    我觉得尽量避免包涵体表达然后复性，本来活性就没法检测，复性后就更不好说了，加长孵化时间看看