请问体转干的四个转录因子在细胞质中存在吗？

msliyv

这文章里好像没有提到用什么方法将蛋白导入细胞的。; ^: S9 K5 F8 |0 ]5 s* z
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至于转录因子进核的问题，我倒不觉得是个问题。因为内源的Oct3/4, Sox2, Klf4, c-Myc表达时也是在细胞质中表达然后通过细胞自己的机制导向到核内。所以只要以合适的方法将四种因子的蛋白导入细胞质，有很大的可能这些蛋白会被运送到细胞核。
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9 f7 B" V/ Z! h  ~另一个问题是你用原核表达的蛋白有活性吗？你如何鉴定他们的活性？3 R* x* g" p% D5 v

0 \6 \/ |* @9 e( i! Y回复 7# ghfvcat

msliyv

再仔细看了看这几篇文章，采用代tag的融合蛋白导入确实不失为一个方法，如果先不考虑tag本身的影响的话。
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7 F4 V4 A: x/ R* S. c9 T$ }7 c4 aDing的文章用的也是原核表达系统，如果他能做出来，那么证明原核表达应该不是问题，或者说对这四个因子来讲转译后修饰并不是活性所需要的。' R) [5 p; Q  G, c* r/ o
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楼主发现蛋白只在核膜周围不进核可以考虑一下蛋白降解和蛋白错误导向的可能性。同时用细胞器染料看看
3 h6 L8 z) |0 s( K- J5 f具体是在什么compartment，比如Golgi，rER，endosome，还是lysosome等。这需要用到Confocal microscope 或者EM

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回复 14# 胡鹏飞 " Z5 t- r/ h! `+ Q0 T7 M

7 v7 U6 y: o- e) l% ^7 V. d我已经了解你表达的蛋白全部到了核膜附件，但是核膜附件的细胞器很多。我的意思是你可以加一些细胞器的染料，比如你表达的蛋白如果是GFP，那你可以用红色荧光的细胞器染料，这样你就可以通过confocal知道你导入的蛋白到底是在什么细胞器中。这对你了解问题所在很重要。已其猜测结果还不如进行这样一个简单的实验看看。
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4 @9 C" z! _2 Z$ ^7 Q如果你发现蛋白在lysosome中，那当然是降解了，如果是在ER等内膜系统，那非常有可能你的tag没有暴露出来或者设计有问题。
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; V$ ~* h% [+ M7 n9 s5 t7 M0 m希望对你有 帮助。有结果也希望告诉大家，这样大家可以一起学习。

msliyv

回复 23# 胡鹏飞 ) \: a4 @- X5 }, ?8 v% x
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没有，不应该