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内容简介
4 h* |+ E( m# Z9 v( m$ G! H! E+ s( e) _: T! b4 Z6 x4 ]1 n
本书分为三篇,原理篇主要介绍了流式细胞术的原理和质量控制方法+ x" q8 I5 z# f5 s* _/ `8 z
/ r% Y& r) U' T4 Q5 w/ R
;操作篇详细地介绍了流式细胞术细胞悬液的制备,以及在具体的各项应
/ @; l( A0 t" [- `' i9 ~3 j9 P4 {/ u
& j8 Y5 z. E( \" [用中流式细胞术的操作方法与技巧:常见问题解答篇采用一问一答的方式
. j7 m) t9 d$ z4 R0 E5 j8 a: C. b
,根据编写人员的实践经验,对流式细胞术中常见的问题进行详细解答。% |1 L$ D) N% H( \& y
# D4 f7 Q% G! U8 K; m; T- N
( q e! y3 U# v6 M基础篇
( ]1 `) V0 | m0 R6 |# J/ a& n2 }5 {+ _" k z' l' m- |
第1章 流式细胞术及其原理
. Y+ W4 j7 G: b2 u
7 c/ n: r- f8 H) E( x$ M& J) \1.1 流式细胞术, r3 o' ?! q* C$ N: L+ g
5 ^% n0 l# ?3 w# j3 w' F* Z
1.2 流式细胞仪的基本结构9 G& r- J" x! h# ~4 T
' L9 t/ x* y/ d1.2.1 液流系统 u, G# u @! ~1 g/ T3 k: l% ?, ?
2 s2 _+ @) }1 z) j: i1.2.2 光学系统9 Z2 H( C5 K) K/ T+ @) j2 ]
: q* i9 w0 I5 z
1.2.3 电子系统9 }& V* s1 Y* F2 N4 f
6 k5 h5 d' p Z2 I0 [: v' u. o1.2.4 分选系统. Z. Y9 y$ I" B) O
3 j, }, b( G1 W# r8 H6 I- m1.3 流式细胞仪的主要技术指标
z( Z# A, U6 w+ }- p: q3 \0 \# ?/ F
1.3.1 荧光分辨率
" i1 u# E7 Y$ c4 ~6 |1 o# t! I# G1 S
1.3.2 荧光灵敏度
4 ~7 O2 q4 ]. l+ N* s3 G7 X; f
% G, i# }! z; E( s J1.3.3 前向角散射光灵敏度+ F8 U3 T1 G3 a9 {7 K' i- c
# O! w; T& P$ G" U; @% E1 X. M
1.3.4 分析/分选速度/ b& Q% S1 p! Y& Q% s; ^
: V7 Q4 n' o7 d! ]1.3.5 分选纯度
a6 Z7 p S- t5 t+ C8 o( D. M# h! a- l9 [+ Y
1.3.6 分选收获率8 V2 p! r+ l3 d" v- ?/ B. P6 Y. I1 r
1 a% A3 J% [7 H9 M8 X1 N' h
参考文献
( ~$ J! z9 y/ R( R5 K9 K G: Z6 |) W4 X. R
第2章 流式细胞术的质量控制
" L3 x8 Y2 v* N# ?' ~% |( L
. `: U0 b: ] b% X1 u2.1 环境要求
' Z; `% @/ F$ S+ a1 M
! r3 Q7 T% Z5 b7 s; K2.2 仪器的校正, @3 S6 N/ O5 t7 z/ h- Z# }* R5 b
" X3 G% O5 [3 `
2.3 样本的要求
; L7 ^) F# d! b' Q; e# z9 ?5 L4 L9 Q5 }
2.4 合理设计对照. F/ W6 z, S& J+ i
' d: n$ h Q5 M" j; m5 B4 M0 ~ |6 v
2.5 获取实验数据和分析
/ ^& n) I; @+ D/ L$ b/ m9 S4 f% q5 K& ?% v p
参考文献
( x S/ w% Q7 t( s, i* r: l8 i) o8 q. R( V
操作篇
8 T" N* \5 u5 X+ _$ v3 ]' s3 u+ B4 k, f" {& H# Y Y
第3章 流式细胞术单细胞悬液的制备* K* }5 \' F$ G) ?( H3 ^. {
& G; |, G) r# W- A" k7 K
3.1 单层培养细胞分散为单个细胞
( m# q& H) _& o+ i. [
9 ~! @3 C$ f8 W. X5 W+ j' O3.2 新鲜实体组织分散为单个细胞
) N3 I$ M! c1 n; v1 I" A9 I# ]# M F, i2 @# Z' X- c- P9 t
3.2.1 机械法4 C: I+ U* ]3 l' o" |" y
3 Z! |; x) K4 z# A3 L
3.2.2 酶处理法
% H) d9 D! J& k( ~# p. ]# E- @
2 \* h% f# U8 C% U3.2.3 化学试剂处理法
" ?- v4 Z" ?/ _$ _
+ D; ]- T6 {5 X& g2 \4 V$ l3.3 石蜡包埋组织分散为单个细胞
( s! n+ E4 v g& B! U( H6 `; A0 U# T% h9 B& r+ ~. p
3.3.1 二甲苯脱蜡法
4 ^. ?% S: @. y- z
$ T; s2 r1 N' e3.3.2 组织清洁剂脱蜡法' J& ?* z8 O# s8 k$ A. t5 C) v
! J/ {: y* ^) g3.3.3 甲氧一双氧水处理法+ A. F' w6 U8 t* H H6 G( l
$ \- ~; m" T" l% M参考文献
2 |0 u2 |" \- L6 C2 c
' _- [( ~7 N" @& s: V) }$ A* [- {第4章 流式细胞术的应用+ L5 K2 E4 h. Q, L7 n# t1 j
0 l: z$ W1 A' f G4.1 细胞周期和DNA倍体分析
$ d8 B5 |" b$ f/ ?% R! x% A: \9 E
" _, F& L G& |3 _$ h' i# t# x4.1.1 概述
! K5 H3 r' {+ X5 d+ P L) C
+ s! W" u, P& p4.1.2 荧光探针8 N/ P! W8 i, Q; j8 C7 V% A( M& Q
. i7 |, [; H; R/ R% h! X+ B
4.1.3 DNA检测的常用术语
/ o7 }; s$ M2 Z& i( o/ @; [: e$ A; k" P) v1 @
4.1.4 样品制备
1 \) Z7 N1 r9 I. f8 t- P; C9 c2 \& r/ J8 P6 w
4.1.5 上机检测(以PI标记的标本在BDFACSCalibur流式细胞仪检测为例)
1 I8 @, ~1 p8 H7 w* w' Y$ M* t4 ?
, w5 ]# ~. V7 C# M7 h3 ~. s# ~6 q8 c1 ?4.1.6 数据分析0 S* j, K2 n! m$ K
2 A- T0 |# j' P
4.1.7 注意事项0 @# q2 N0 s2 X( ?
& q" t# N. M6 c1 b+ I- }
4.1.8 应用举例0 f' V1 T8 o3 p4 Q
8 J5 J: E0 |( I# ^. g q6 X
4.2 DNA的双参数分析
. J9 Y' K) v- Y
2 i; d. O" ]( f1 ~! Q4.2.1 试剂
& E/ T0 b {% }2 l: h& \' N y' M: A; O. u( F5 g
4.2.2 样品制备0 y5 X0 \3 f9 L6 y" B2 E4 d
9 |& t9 `$ g9 W+ T
4.2.3 上机检测
+ j" d; F. K! }. G1 ^. ~' E2 F% M/ Z6 U" I5 I! u
4.2.4 结果分析
, j$ m# T% k' m6 |5 S. `% Q% D
) x, l) u' n1 W- }+ W1 z7 j% I! B) w* C4.2.5 注意事项
8 j# s9 B3 o4 ]
) |( n0 G5 ?* o7 T% a5 K) e4.3 凋亡检测/ Z0 S, U8 z& a$ F( ^- Z, S
9 S& T5 s o' G( _1 K4.3.1 凋亡的诱导) Z. T2 Z" K! _0 v
3 j( @$ B7 M: [1 E+ m% ^+ a4.3.2 细胞凋亡的形态学分析- h% g U) M/ T" h# H6 ?' T
& a" x2 d6 ~; l4.3.3 AnnexinV凋亡检测法' x# W3 }. c( ?% b1 t2 c3 C
: @( U d, s {, x3 a5 X5 K4.3.4 caspase一3分析$ }$ H0 f: H( T; E! H
; y i' y' E. C" z- v4.3.5 碘化丙啶(PI)单染色法
5 c( [ I7 ~1 x% T/ T4 b; d
! [5 _ D9 F. j( L8 u+ U4.3.6 线粒体膜电位的检测% j- S( _0 B' c) w! a& z
% G) L+ M" x3 k4.3.7 细胞内活性氧的检测
' W2 v- ?% f4 H% f# N6 R9 S* V
2 j+ C# P' [& n4.3.8 DNA片段检测
+ p* O# L* [4 i/ r
6 @6 P" |, @8 c# B" }: l4.4 肿瘤细胞多药耐药检测
& `4 C6 K$ t8 }( s7 k- } J
5 M2 o3 z, F j& f6 ~5 u4.4.1 细胞表面膜糖蛋白表达水平的检测
0 j1 g) y: q; d7 ?9 g- I% B
1 ]) ~: p8 m6 S- ]6 c' V8 [! V4.4.2 罗丹明123蓄积实验
% R7 U; W! g) Y8 q( L
; q* ~3 J% c4 P: @' G/ F4 V2 O7 q4.5 细胞免疫表型分析. z+ L8 G6 v# U: h3 Y5 N
# ]% d7 c, ` M4.5.1 概述
0 C8 c% w6 C7 l! _- I
" C# Y3 g/ i( l, j/ b8 k5 |2 g, A4.5.2 淋巴细胞免疫表型分析
9 o7 p- m0 \1 n& i- u9 z l5 y2 y9 {" k$ b$ [
4.5.3 应用举例
. M1 C$ l9 A" @1 C( H
5 J/ P+ O6 z5 o: C4.5.4 影响免疫表型分析的一些问题
: Q# ?9 b+ j n9 L- h* C9 ^
L, s" e- Q2 E5 v* M4.6 细胞因子的测定
* V& k& L$ L% v+ V) H
- C) d# P* r. N2 o; j1 @% U4.6.1 细胞内细胞因子检测4 {! E9 w+ {/ `! g
* A9 y/ c* g5 |$ ? z- C8 G+ v4.6.2 流式微球分析(cytometric beads array,CBA)法检测细胞外细胞因子0 Q9 j- z- \3 |' w- y _
: H% t- G0 c7 `1 m# O( Y M, W参考文献* z5 @+ f- M1 c b" V
' p, r; d+ g* K3 ^6 i1 t常见问题解答篇
( M* j' c* `& x S, N/ O4 z) B; j; i( ?+ \* @. z, \, s; k3 H
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