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内容简介! ?* A+ G% R0 \: N
) T7 c. i9 m2 q8 W+ p2 K& |- M- T
本书分为三篇,原理篇主要介绍了流式细胞术的原理和质量控制方法
; O ]# Q2 D ]3 T7 ^
: W O: e% w K# f8 I4 V6 X;操作篇详细地介绍了流式细胞术细胞悬液的制备,以及在具体的各项应
( H5 J$ B; l: L, p' d, o2 ^5 ]. p8 H9 ~6 @ d9 m: A
用中流式细胞术的操作方法与技巧:常见问题解答篇采用一问一答的方式- O$ n2 g3 m a+ O4 J
) r# ]. |6 q; U. ?; b. I$ x,根据编写人员的实践经验,对流式细胞术中常见的问题进行详细解答。3 u2 s5 _- F" S' d( q
: F6 f3 W/ ]2 I; G
# |- ` k9 T- W3 Q. |5 x8 |% R
基础篇: B& Q5 Z( U% W4 m. N$ @' d
) T3 f) C0 K2 O8 _2 j: T
第1章 流式细胞术及其原理 |! F2 B2 p: X. Q. I5 f0 B7 o' R
2 w! s1 J( R: j& L# W1 _) o
1.1 流式细胞术5 E" H3 k7 E8 \* E+ Q2 {
5 i( Y6 g p. _' {
1.2 流式细胞仪的基本结构
4 B' L/ Q3 I4 x; O7 W: N. ~
2 F$ v: r9 _: v8 Z0 W1.2.1 液流系统
: S& u) G2 P, D2 K }$ N
7 ?5 u! e2 A) }; ~4 y1.2.2 光学系统! a$ I6 K `8 R3 K8 N9 d
9 m' j. {* @- I6 D* ?" Y1.2.3 电子系统0 {5 i$ I3 x5 L! z3 Z
' p4 M" @3 u% q' ]3 |+ E+ M" k J1.2.4 分选系统
" o3 l5 p6 h+ N/ ^+ R. u
: k' c8 K, `2 y0 ^% w6 y x1.3 流式细胞仪的主要技术指标
3 A% O G1 M4 o4 d& D$ p" F5 Z7 \! G. u! l
1.3.1 荧光分辨率" y0 ?% j0 H* X) y7 o9 J$ n0 h, ~. z
' J* V2 s9 T- B1 O
1.3.2 荧光灵敏度! C$ r7 j; f: Z
: d" V J7 E% ` H3 y
1.3.3 前向角散射光灵敏度
& q9 t) ~! | |, t- |: d
2 l% E* z+ L2 A3 A" B4 Y1.3.4 分析/分选速度( m* e E( h# n3 t
& E8 `; Z) N E s5 }1.3.5 分选纯度
# K) g! i! x; {9 P: m8 Q
6 n0 O: C1 d6 r, e1.3.6 分选收获率/ D# O$ c T" d9 Y8 `
/ K' }8 j, I1 k参考文献
, b7 _/ `, D1 N' l1 B8 D y3 s$ ~' c& ^: d
第2章 流式细胞术的质量控制
' \/ `2 i4 d8 o) k+ l/ V/ }9 D3 m) J; ]- H4 A: e+ \
2.1 环境要求
$ D! V6 z, n( u9 x- \$ x2 K# R7 {+ P% o* H' O
2.2 仪器的校正& @ E/ t2 v1 U) `! d( f8 M
1 v# @0 Z# ~4 i+ @
2.3 样本的要求" D+ H0 R0 ?; {; E2 s. x7 n9 m9 u
, W9 M8 X- @8 y7 y0 i/ ]
2.4 合理设计对照8 ^! y6 H2 M/ e9 o" f$ \/ m8 I0 G# Z
* Y# y. M$ _- m: z! R# [" B
2.5 获取实验数据和分析
t7 }5 q! ]( T4 P$ e' k8 |# B% z7 j
参考文献
6 u) k& u: K; O) M0 G1 I c- Q3 V% M/ F j
操作篇! b0 @6 F# `' ^, V( I$ e
: d5 q1 f! h9 J第3章 流式细胞术单细胞悬液的制备! _6 u3 I3 D' ?1 \
0 n! _. v- j* H6 B* c9 Z( y- q' l3.1 单层培养细胞分散为单个细胞3 r8 f; O5 R# z+ P0 g' O
+ ]' z) P# C3 H& X% ]$ A3.2 新鲜实体组织分散为单个细胞, J" E$ o9 P% N6 a3 E8 C l
. i5 l2 ~' @# {6 ~% ^; _3.2.1 机械法5 R. R# ~ e- X# x
( \- p! ?% V' [ d1 v
3.2.2 酶处理法- |5 U$ y& n: G5 `7 i& u1 t- s
+ x' w) ?* u+ N3 O2 }0 L/ ]
3.2.3 化学试剂处理法
^2 @: h% T9 g9 w) Z0 s" ?
: }6 N+ C% v( {* U3 _8 S. A2 ?2 S3.3 石蜡包埋组织分散为单个细胞
- Q6 D# N7 C( I4 e
- h# _2 K/ ~2 } q4 b3.3.1 二甲苯脱蜡法
9 q' T4 |% J9 L$ n! C7 g. G" g4 J% {4 g) U
3.3.2 组织清洁剂脱蜡法. [- u. x/ z, G
# J }2 G' L) B& z; E \3.3.3 甲氧一双氧水处理法
" F- N. x0 x( ~; q+ R: H
; M4 a3 h+ R+ G# l! L参考文献# O& ?3 u* [) g0 u' H2 y- F0 P, o
, P: Q# w `9 \/ {1 j
第4章 流式细胞术的应用* n) y+ ]7 r; E- |1 j9 L
z z3 z* Z$ J" }8 f6 [* R i
4.1 细胞周期和DNA倍体分析4 p% S! x8 S: C/ s* L
+ K0 J+ S) |: O- H% A3 Y
4.1.1 概述
. K3 R* {* i+ D# ^9 X, P6 f Q2 \% H! P6 C% E
4.1.2 荧光探针( m/ B; z' F0 Z& u
. b+ D) ]/ [: `/ z. _
4.1.3 DNA检测的常用术语* [0 x. {, y. ?" J' \" G( l6 y
0 d7 ^4 t8 E7 H# q, u
4.1.4 样品制备
+ F! J' g+ e ^& Y9 ~5 X
4 N" s& \" k. T4.1.5 上机检测(以PI标记的标本在BDFACSCalibur流式细胞仪检测为例)9 {8 j7 c# w& H0 I5 \$ ^4 W# J/ Y
9 l5 W: ~7 C3 J2 i/ b4.1.6 数据分析
) d* O6 R( s* }) I* z
4 R" `: `* X/ q4.1.7 注意事项, o) p+ |5 x% k- o: g
2 N$ }+ ~( q! A5 l8 b& O/ t4.1.8 应用举例% _9 k1 t0 T, t4 E
7 ~+ x0 K( C, Y8 W7 P
4.2 DNA的双参数分析
' b# J7 T! i* `& F7 T* R0 p1 U P2 X3 u3 O
4.2.1 试剂
1 R. q0 M8 Q3 U( y( j
]/ T3 x% n: E4 v( l) G4 m$ W4.2.2 样品制备
E" R, l. M$ ?2 ]7 [. z( Q6 [
4.2.3 上机检测, Q8 K! y+ x7 f
( g. ]" j! r; k, S8 p) D3 i4.2.4 结果分析
. ~) F2 ?: a! ]+ b6 Z7 ?% q8 J5 {5 ]; c
4.2.5 注意事项
# ^; Z- D$ `5 f* C6 y* ~8 G* ?# R4 o8 ?' X1 Q4 R
4.3 凋亡检测
$ Z+ O4 u! `, K1 F' E/ K# y( i6 A: I, R: y/ O
4.3.1 凋亡的诱导( _! Y1 ^1 ]# C# b9 ^
5 m# H/ D% i p- W. P0 Q3 ^" ^4.3.2 细胞凋亡的形态学分析2 J3 \$ }' T4 `8 w9 C( V# x
$ u( h2 N$ T# O0 k5 e6 k
4.3.3 AnnexinV凋亡检测法$ R5 O2 ^" m4 Q% k
# T: z% M1 |2 G- z4.3.4 caspase一3分析* E8 f6 s. {2 e7 ]+ m' v X
7 G' [" r8 h% r4.3.5 碘化丙啶(PI)单染色法
. ^7 a! n# H: g( K# E4 K7 }' i& {; ^# K$ t7 z5 E9 [% u
4.3.6 线粒体膜电位的检测, l9 n/ M/ Y( G
* x; U: ~2 @, w4 }: G( c4.3.7 细胞内活性氧的检测% v% o P9 I0 Z
& h# S! c/ R8 |4.3.8 DNA片段检测
) ]4 X1 s' b5 H5 n& |1 d7 _
( P# B, n/ o! t9 t0 T* _' }4.4 肿瘤细胞多药耐药检测
) [$ a+ W( G% p0 h$ E& t
' S9 Y7 o" U% j& C q# S8 ?4.4.1 细胞表面膜糖蛋白表达水平的检测3 H$ H& ?# \% f; N
8 z* }$ J6 f, l1 w/ u% j) j4.4.2 罗丹明123蓄积实验
# P; A. h% y" X: c- U$ F4 D
# z* Y+ b& k0 G# T" p/ q5 \: R& x4.5 细胞免疫表型分析
4 u: b3 e y* N, j$ k
0 ?) h+ r# F5 s. \" T% q4.5.1 概述
* ?* V; C2 I+ l$ I& a( G
+ b- O, p$ Q* n) L4.5.2 淋巴细胞免疫表型分析6 Z, n X4 @( G$ I" z
" _& Q7 C' e% b; j, _
4.5.3 应用举例; F2 E' q/ B' t# d
; a7 Z( ]+ i; y9 S) D4.5.4 影响免疫表型分析的一些问题
; q# w% s0 v8 v) ^- m# K
8 {* i2 o0 h* j% g+ _4.6 细胞因子的测定
) B; q, O& T4 A. z! }
) a" X a7 ^. P' \4 U9 z U4.6.1 细胞内细胞因子检测
) `( Q' ]( t1 k: Q- y: Y/ }
2 s: ]3 o3 v$ Y- \4.6.2 流式微球分析(cytometric beads array,CBA)法检测细胞外细胞因子
& \" e0 P1 M- g) m$ w! {8 Z
3 r: m. O* I3 V/ ]3 T参考文献+ q$ w/ `4 S; j$ Q' a
* n- P" H$ L$ U4 b. ?3 a; B) E
常见问题解答篇
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