再次求助：干细胞传代的问题

icesnow

两天前传代的干细胞，传了两瓶，今天发现其中一瓶长的很好，可是另一瓶只有很少贴壁，多数都附着在瓶壁上没长开，还是圆形。
, G" c4 p# r0 }  d: r问题是两瓶都是一样的操作和条件，不知道为什么会有这么大的差距
1 ]! B% w  ~; x. F$ V+ s( X, @5 h2 b  M. }* C+ j! k6 L6 S4 t
希望有高手解释，谢谢

cortex

具体点，说的太笼统，别人没办法给你回答！
: h+ [4 a1 e4 I- n# Q瓶子怎么处理，饲养层处理急状态，手工传代还是消化？
, V4 z  |6 \1 f最好有照片！

细胞海洋

楼上说的很对 什么干细胞

ljs

首先：楼主的问题就有疑问：你如何确定你的操作和器皿是相同的？比如你的两个瓶子是经过相同的处理的吗？所有的试剂都是相同的吗？你有仔细记录试验操作吗？条件都是相同的，你如何确定？5 r- }7 L* ]% N2 d* L5 S
我的意思是：在你没有找到答案之前，每个步骤都有可能导致这个结果。而你自己在脑子里就已经排除了很多值得你去寻找的问题。
& g# }4 R7 c: a) _& _0 t7 R4 A我的意思你明白了吗?祝你成功。

icesnow

谢谢各位的提醒。  F. ]8 W( |  i" ], B5 j
这两张是传代后两瓶细胞的照片
8 w! t3 X$ \( S5 H培养的是人脐带干细胞，从第二代传出来的第三代，用的同样的培养液和pbs，胰酶也是同一瓶，培养瓶都是新的一次性培养瓶。4 K: e' {2 u9 H. |9 S) @. T+ w
胰酶在培养箱里消化1min，轻轻吹一会，在镜下看都离壁，分装两瓶。7 g6 N: K$ K7 Y
谢谢

hawkyiger

高倍镜下仔细观察一下是否污染？

hawkyiger

补充一下，首先有一瓶传代效果还可以的话就不是细胞的原因，那么可能是在具体操作过程中出现了一些失误等导致这种不同，这点自己回顾琢磨。但可能有污染可能，那样的话赶快丢弃，以免造成更多污染。

kqyy

好像出现了分化哦

have-a-rest

再做一次，如果不能重复说明就是操作的某些容易忽略的细节上出了问题。
3 w% @" e- p( }$ G另外，你消化后不离心直接1分为2？1分钟消化下来说明胰酶的浓度高了些，调整一下，5-10分钟消化起来对细胞损伤要小一些。

helen841102

我也遇到过这种情况 两瓶同样的操作 可是一瓶长得好 一瓶却状态不佳 很想知道为什么 操作是一样的同时操作