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再次求助:干细胞传代的问题   [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2010-2-1 13:10 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
两天前传代的干细胞,传了两瓶,今天发现其中一瓶长的很好,可是另一瓶只有很少贴壁,多数都附着在瓶壁上没长开,还是圆形。2 f1 [$ H& V$ L! C' @1 d$ m
问题是两瓶都是一样的操作和条件,不知道为什么会有这么大的差距/ p' v4 j. k3 Q9 T

; J9 N4 P: N/ u9 h# J, S% T" g% V希望有高手解释,谢谢
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沙发
发表于 2010-2-1 13:54 |只看该作者
具体点,说的太笼统,别人没办法给你回答!- |9 s5 Y7 r$ o
瓶子怎么处理,饲养层处理急状态,手工传代还是消化?
/ y! u+ c) U" E0 G( c0 F0 f3 L最好有照片!

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藤椅
发表于 2010-2-1 14:41 |只看该作者
楼上说的很对 什么干细胞

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板凳
发表于 2010-2-2 18:21 |只看该作者
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首先:楼主的问题就有疑问:你如何确定你的操作和器皿是相同的?比如你的两个瓶子是经过相同的处理的吗?所有的试剂都是相同的吗?你有仔细记录试验操作吗?条件都是相同的,你如何确定?
- n7 Q, R- Y6 p9 {! F我的意思是:在你没有找到答案之前,每个步骤都有可能导致这个结果。而你自己在脑子里就已经排除了很多值得你去寻找的问题。9 Q1 |! O! N8 f/ f+ |" u5 I0 C9 X
我的意思你明白了吗?祝你成功。
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报纸
发表于 2010-2-3 10:22 |只看该作者
谢谢各位的提醒。8 }  `7 c1 g5 \5 R
这两张是传代后两瓶细胞的照片
5 L5 y- z! J$ O( m培养的是人脐带干细胞,从第二代传出来的第三代,用的同样的培养液和pbs,胰酶也是同一瓶,培养瓶都是新的一次性培养瓶。
& M& ]0 p4 v4 Q/ k3 i9 }胰酶在培养箱里消化1min,轻轻吹一会,在镜下看都离壁,分装两瓶。$ P# j, e8 j1 N  {- u3 n2 I2 u
谢谢
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地板
发表于 2010-2-3 11:28 |只看该作者
高倍镜下仔细观察一下是否污染?

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发表于 2010-2-3 11:42 |只看该作者
补充一下,首先有一瓶传代效果还可以的话就不是细胞的原因,那么可能是在具体操作过程中出现了一些失误等导致这种不同,这点自己回顾琢磨。但可能有污染可能,那样的话赶快丢弃,以免造成更多污染。
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发表于 2010-2-3 19:07 |只看该作者
好像出现了分化哦

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发表于 2010-2-3 20:53 |只看该作者
再做一次,如果不能重复说明就是操作的某些容易忽略的细节上出了问题。
& \* Y$ c9 V$ r/ d3 H+ w另外,你消化后不离心直接1分为2?1分钟消化下来说明胰酶的浓度高了些,调整一下,5-10分钟消化起来对细胞损伤要小一些。
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发表于 2010-2-3 23:25 |只看该作者
我也遇到过这种情况 两瓶同样的操作 可是一瓶长得好 一瓶却状态不佳 很想知道为什么 操作是一样的同时操作
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