再次求助：干细胞传代的问题

icesnow

两天前传代的干细胞，传了两瓶，今天发现其中一瓶长的很好，可是另一瓶只有很少贴壁，多数都附着在瓶壁上没长开，还是圆形。( M8 I8 |2 k1 J5 H! I0 B( q- |3 O
问题是两瓶都是一样的操作和条件，不知道为什么会有这么大的差距! \, B4 Z/ T8 o7 H0 \
  l$ z0 H9 \( v8 M% Z- V
希望有高手解释，谢谢

cortex

具体点，说的太笼统，别人没办法给你回答！
$ s7 ?- T+ l9 {5 G瓶子怎么处理，饲养层处理急状态，手工传代还是消化？
. @( S  ?" r1 D; f( R: m最好有照片！

细胞海洋

楼上说的很对 什么干细胞

ljs

首先：楼主的问题就有疑问：你如何确定你的操作和器皿是相同的？比如你的两个瓶子是经过相同的处理的吗？所有的试剂都是相同的吗？你有仔细记录试验操作吗？条件都是相同的，你如何确定？
0 S! |# x0 x0 \我的意思是：在你没有找到答案之前，每个步骤都有可能导致这个结果。而你自己在脑子里就已经排除了很多值得你去寻找的问题。
) c, {  S$ [6 y0 K$ k$ T' a我的意思你明白了吗?祝你成功。

icesnow

谢谢各位的提醒。
5 f, g4 Y+ S6 y0 @) f这两张是传代后两瓶细胞的照片8 Y3 b. m0 d1 O9 m% [, n
培养的是人脐带干细胞，从第二代传出来的第三代，用的同样的培养液和pbs，胰酶也是同一瓶，培养瓶都是新的一次性培养瓶。" y% }: K8 b$ I
胰酶在培养箱里消化1min，轻轻吹一会，在镜下看都离壁，分装两瓶。5 u' j$ E( D1 h2 B, z0 z1 k
谢谢

hawkyiger

高倍镜下仔细观察一下是否污染？

hawkyiger

补充一下，首先有一瓶传代效果还可以的话就不是细胞的原因，那么可能是在具体操作过程中出现了一些失误等导致这种不同，这点自己回顾琢磨。但可能有污染可能，那样的话赶快丢弃，以免造成更多污染。

kqyy

好像出现了分化哦

have-a-rest

再做一次，如果不能重复说明就是操作的某些容易忽略的细节上出了问题。
4 w: y3 @; J* ]4 V) l% X另外，你消化后不离心直接1分为2？1分钟消化下来说明胰酶的浓度高了些，调整一下，5-10分钟消化起来对细胞损伤要小一些。

helen841102

我也遇到过这种情况 两瓶同样的操作 可是一瓶长得好 一瓶却状态不佳 很想知道为什么 操作是一样的同时操作