脐血中的造血干细胞和单个核细胞PBMC是一个东西吗？

fenglinzhu

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! O+ Y/ X) s2 y" g+ w- B) E0 T. a　外周血单个核细胞（Peripheralbloodmononuclearcell，PBMC)即外周血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞和单核细胞。即非骨髓血中的单核造血干细胞。你好像理解错MC的意思了

fenglinzhu

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( t0 x; M7 \3 Y) X3 R$ r: [
+ L" H2 ]# _/ o! C用羟乙基淀粉分离50ml脐血，然后用红细胞裂解液裂解，平均计数得2*108个细胞。% H( I# A) i1 v% c  ~5 n
骨髓移植所需要的CD34+（造血干）细胞量为2*106/kg，脐血一般情况下只能满足10岁以下，体重不超过30kg的患者使用，按30kg算的话，一般情况下CD34+细胞大概有6*107个，占所有有核细胞的33%左右。9 T; W: x3 r7 A0 N; g+ W# i
不用红细胞裂解液裂解的情况下会有很多红细胞，没做过具体的计算。9 m: N! \! K: o3 g/ _$ H
以上是我最近做的10次羟乙基淀粉分离脐血的平均数据。

fenglinzhu

回复 jiuxuya 的帖子! Z9 i$ d, l+ F3 B7 O1 ~+ l
; x- K+ A4 X" B( g3 V2 W2 ]
灏洋的羟乙基推荐的使用方法就是羟乙基+FIOCOLL分离，我觉得这应该是用羟乙基初步去除红细胞，在用FIOCOLL分离，提高FIOCOLL的工作效率。但是多一次分离，细胞就会多一点损失，当然这只是我的估计啊，实际还是以实验为主。不过单核细胞肯定没有有核细胞数量多的。有核细胞包括单核细胞吧，我是这么认为的，也不确定对不对。

fenglinzhu

回复 jiuxuya 的帖子9 e( ~" Z9 Q) o8 |2 S

: J8 S0 i) J9 E$ s可以多次羟乙基处理，但我没试过，觉得太费时间，所以我用羟乙基一次处理后离心，然后收集沉淀用红细胞裂解液裂解后，总体来说平均能收到2*108个有核细胞吧，回收率没算过，近期准备跑一下流式看看CD34+含量，到时候看看含量到底有多少。用FIOCOLL分离大概能分离到1-2*107个细胞。2 W) \1 F( x, F8 X5 q- \
红细胞裂解液裂解效果还是挺好的，但是还是会影响活率，但是我觉得这样会省时省料。

fenglinzhu

回复 jiuxuya 的帖子" |" }+ O/ `" D9 v
4 p, u! r2 d# `/ I' d1 ]- m
骨髓移植所需要的CD34+（造血干）细胞量为2*106/kg，这是治疗标准。而脐血一般情况下只能满足10岁以下，体重不超过30kg的患者使用，按30kg算的话，也就是说一般情况下CD34+细胞大概有6*107个（这个数据是我根据治疗标准推算出来的），而我收到的细胞总数平均是2*108个，也就是理论上CD34+细胞应该占我收集到的有核细胞数的30%左右，实际的话要等跑了流式才能知道，近期我会做一些流式数据出来。

fenglinzhu

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, @2 M% z' Q- s6 Q" ~# N& T- {/ r2 s1 V' C8 ^0 f
其实你细心观察的话沉降完离心结束后能够看到红细胞上面有一层薄薄的白色细胞层，那一层就是有核细胞。我就吸去那一层，尽量不吸去下面的红细胞，然后再用红细胞裂解液裂解，裂解完离心沉淀就是白色的细胞。

fenglinzhu

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0 Y' F; ^5 n1 {( j' R8 Y! u7 ^& l9 v2 f
http://www.docin.com/p-1852582053.html
0 k  ~; m) v3 s. V  c5 d链接是2017版的造血干移植规范
3 }4 E$ e6 ~+ ?- @1 Q' q: K# n" c我记错了，脐血移植的话CD34+细胞要求为2*105/kg，
4 n6 c- a. O- V+ [- t& \/ A4 V! d% U外周血移植CD34+细胞为2*106/kg: a4 u- Y+ o, n5 l- `0 T$ M' }
所以我之前算出来的占有率应该也是错的。

fenglinzhu

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: X; l3 A4 D  i/ M: u; j2 Y
% ^: q; _4 A" j" n9 R我觉得这个没法比较吧，得到的东西不一样，HES不管你分几次，你得到的都是有核细胞，用了FICOLL得到的是单核细胞，HES再FICOLL可以减少FICOLL的使用量和FICOLL的工作效率，但是FICOLL分离得到的单核细胞肯定比有核细胞来的少，差了一个数量级，数据上会显的少一点。其次，因为造血干本身含量非常少，在造血干细胞总数一定的情况下，当然是其他细胞多一点，冻存的时候造血干的死亡率会稍微低一点，但如果细胞数量太多的话，又会耗费太多空间和试剂去冻存，所以我选择HES+红细胞裂解这个方案。

fenglinzhu

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0 k  u5 E& f+ U4 M1 `5 a' N0 Q8 A$ ~3 q5 w" b4 m. a3 w' i8 }
做免疫细胞诱导用FICOLL啊