NSC传代

jennyshy

这是分享丁香园里高手的传代protocol，我也按照他的方法做了，效果不错，大家共分享。
, @" D. f; q0 @2 a. \培养基DMEM/F12+EGF 20ng/mL +bFGF  20ng/mL +1%双抗，推荐用的消化酶是Accutase(sigma)，传代的神经球大小的上下限是200~300um

1：将待传的细胞球转入15mL离心管。9 k  W0 \0 N$ f
2：室温800rpm离心3分钟。- {& W% @' A* L1 y8 D4 i
3：去除培养基，保留（或重新添加）150~200uL，重悬。
/ s" N) a+ E5 y* C以下步骤可选：
4 g/ Q/ v5 }# o, O. M4：加入~1mL胰酶或Accutase，重悬细胞。( U' {/ C( A! s' y- ~
5：置于孵箱，消化5分钟。9 e7 v5 a& {) y3 E0 D
6：室温800rpm离心3分钟。
* I! a  B1 u, v, k8 I" \. }7：以150~200uL培养基重悬。( _. N* l" M. P% O' g+ I/ D% T
8：（上接步骤3或7）3 s% N: J2 l% g$ F
以枪和枪头在离心管中对小体积的悬液进行连继吹打，吹打次数以球的大小和个人经验而定，我对如上述大小的球一般吹打30~50次。) h2 s; F4 v  y8 j2 k( U
（这是整个过程最重要步骤。（1）注意无菌操作，枪头高压，枪在使用前用酒精棉擦一下，在超净台内紫外照一会儿。（2）吹打时，枪头抵住管底，以获得最大剪切力。（3）吹打动作要果断，每次吸入要满量程，但注意动作也不能过猛。
' P6 M" c: N% c! t$ F% t9：
3 d+ x$ C' ^" u接种至新培养皿，培养。

细胞海洋

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happyhn

我1100 rpm 8min 离心后上清还有细胞的， 我用invitrogen的tryple 消化成年神经干细胞，37度消化6min 但传一代，细胞就会死一部分，传到3代左右，细胞就很少啦，请问这会是什么原因呢

happyhn

我1100 rpm 8min 离心后上清还有细胞的， 我用invitrogen的tryple 消化成年神经干细胞，37度消化6min 但传一代，细胞就会死一部分，传到3代左右，细胞就很少啦，请问这会是什么原因呢

nangongrui

非常感谢，好好学习一下

郭少爷

室温800rpm离心3分钟.
0 \( T6 h; Q# @2 h我都是用1000rpm的

death0270

15ml的离心管，体积在四分之三一下的话没问题的，但是如果是50ml离心管，四分之三体积，建议1200-1300RPM，当然用离心力算最好了，50ml是600-800G，5分钟，根据你培养液的粘稠度来调整时间。

luckydog

800r/min 能将细胞沉淀不

luckydog

呵呵，学习一下

egou2662

谢谢