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本帖最后由 细胞海洋 于 2010-3-13 19:43 编辑 这是分享丁香园里高手的传代protocol，我也按照他的方法做了，效果不错，大家共分享。
2 N+ k( G" Z/ t/ `" B0 a; W8 I$ [培养基DMEM/F12+EGF 20ng/mL +bFGF 20ng/mL +1%双抗，推荐用的消化酶是Accutase(sigma)，传代的神经球大小的上下限是200~300um
2：室温800rpm离心3分钟。
0 [ [: P- X2 l- `$ j1 ^3：去除培养基，保留（或重新添加）150~200uL，重悬。1 F7 y- C4 F5 p0 m9 Y& P4 l: z
以下步骤可选：# A; l, c3 f* k3 e a
4：加入~1mL胰酶或Accutase，重悬细胞。
2 O- w( V- C- e" F" @! @, n, J) C5：置于孵箱，消化5分钟。
- e% j. o1 q, ]! A7 R6：室温800rpm离心3分钟。9 }& _! x/ i) n5 b0 b7 K4 w
7：以150~200uL培养基重悬。; I3 |- Z* @" W+ t, r
8：（上接步骤3或7）
8 n& G7 i0 O% E* l L( \& M+ W8 L以枪和枪头在离心管中对小体积的悬液进行连继吹打，吹打次数以球的大小和个人经验而定，我对如上述大小的球一般吹打30~50次。2 U4 ] q! M) {) b" O# o
（这是整个过程最重要步骤。（1）注意无菌操作，枪头高压，枪在使用前用酒精棉擦一下，在超净台内紫外照一会儿。（2）吹打时，枪头抵住管底，以获得最大剪切力。（3）吹打动作要果断，每次吸入要满量程，但注意动作也不能过猛。* |$ o* w) W. L
9：' O5 A L- g/ E r& C
接种至新培养皿，培养。 |
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发表于 2010-3-5 10:48
