大家谈谈你们是怎么培养ES细胞的？

runner

刚接触ES的培养0 Y" l$ T8 n( z0 J$ Y4 `
新实验室规定MEF和ES每天都要换液，而且消化的时候要37度消化满5分钟3 x/ o) C' r# c- ~

4 G1 w0 o! p9 h' e$ A我以前养其他细胞的时候，一般都是隔2～3天才换一次液的，细胞消化也很快，基本上室温几十秒到两三分钟就消化下来了。* V4 r6 Q) [4 Q! ~

6 p" R$ o+ Y) x( V7 |8 \) W请问大家，有必要每天都换液，每次消化都要满5分钟吗？（肉眼观察3分钟细胞已经成片脱落下来了，很担心会消化过头）

jsy

我觉得消化时间是由胰酶浓度来定的，0.25%胰酶消化MES时2到三分钟即可，可以在镜子下看是否大部分已经脱落，而且可以敲打侧壁加速脱落。实验细节完全可以根据实际情况来作调整。

starlight

& Q5 V6 V( D- j5 z
2 Q3 G; Y  u  o' J我主要在养mESC，消化的控制其实看胰蛋白酶的效价，我们消化用的是0.125%的胰酶，消化时间大约2-3分钟就够，消化的时候如果轻晃瓶底消化液，使细胞充分接触消化液，有助于提高消化速度，但不能晃得过猛，克隆内细胞边界清楚但整个克隆没有浮起就可以中和了；
6 I2 W9 Q+ T$ B! k1 n
3 L' }  \' Z) j$ O2 `4 x换液是看传代之后细胞状态，如果传代后细胞浮起较多，第二天需换液；不过我们实验室也有人传代第二天总换液的，这样可能对细胞是最好的；

blue11sea

我也培养ES细胞，每天换液较好，胰酶用0.05%，不用固定的消化时间，

have-a-rest

ES不同于其他细胞，要好生伺候才会有好的结果。换液看情况了，刚传代可以隔天换液，后期生长快，需要每天换液，而且要增加培养基的量。消化吗，时间和酶的浓度、细胞的状态密切相关，不可一概而论，要看情况灵活掌握运用。

jldbb

ES细胞每天换液，
$ j% T& a! f8 R6 X: KMEF如果是做FEEDER用的，照射过，没有必要换吧

旺旺

我也是每天换液，基本固定时间，

旺旺

我也是每天换液，基本固定时间，

niyou

回复楼主：
! Z8 F* j6 O: A; w  X+ W我做胚胎干细胞培养（mES）已有六年。我谈一下经验：; }* L5 @- {+ o
1、最好每天都换液，最好每天都在固定的时间换；
! ?5 ~! t, S( X5 k* L) ^3 Z2、用0.05%的胰酶（Gibco,含0.02% EDTA）消化30秒-2分钟，其实1分钟足够，关键是提前将细胞用37度预温的PBS洗1－2次，加入已37度预温好的胰酶，效果很好。消化时最好在显微镜下观察，有多数细胞脱落即可。

栀子花开

回复 1# runner . U% i" `, K0 L/ G) I: q
2 D) x7 L6 v1 I
- u. ^7 G2 _9 ?' C4 K: l
    消化这个步骤不能把时间定死了吧，应该是要在显微镜下观察，就像上面同仁说的，有多数细胞脱落即可，此时你稍微轻轻摇晃下，其他细胞即可脱落。
* G% \; l* K, X; {消化时间太长，确实不利于细胞的生长啊！
1 ^  Z- Y8 ]. L) K( Z7 z. D不知道说的有没有道理